食品中四环素的高灵敏免疫层析检测方法研究

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四环素(tetracycline,TET)作为一种广谱抗生素,已广泛用于饲料添加剂中。目前,食品中抗生素的残留问题备受关注,长期食用含有TET残留的食物,会引起人类的过敏反应、胃肠道紊乱,肝毒性以及耐药性等。迄今为止,一系列的分析方法已应用于TET的检测中,主要包括液相色谱-质谱仪、电化学分析、酶联免疫吸附和荧光检测等。然而,这些方法在现场检测方面有许多局限性,如费时、样品预处理复杂、检测仪器昂贵等。侧流免疫层析法(lateral flow immunoassay,LFIA)作为先进的现场检测平台,由于其操作简单、检测时间短、非实验室环境和用户友好性,在食品安全检查方面得到了广泛的应用。本研究构建了两种高灵敏检测TET的免疫层析试纸,主要研究成果如下:(1)基于菱形铝纳米载体的荧光侧流免疫层析法(rhombic-like Al nanosupporter-based fluorescent LFIA,RAl NS-FLFIA)的建立及性能评价。以Al3+为中心金属离子,2-氨基对苯二甲酸为配体,采用一步水热法制备了RAl NS。它不仅具有出色的荧光强度、良好的水稳定性和热稳定性,而且可以通过简单离心吸附抗体(antibodies,Abs)获得RAl NS-Ab探针。在最佳条件下,该传感器的检测限(LOD)为0.0516 ng/m L,是传统胶体金试纸条(traditional colloidal gold-based LFIA,AuNPs-LFIA)的18倍,且该传感器对TET具有较高的特异性。此外,RAlNS-FLFIA还成功地应用于牛肉、鸡肉、牛奶和蜂蜜样品中TET的加标检测。新型的RAl NS-FLFIA传感器为食品中其它有害物质的检测提供了新的平台。(2)基于分层二硫化钨纳米片的侧流免疫层析法(tungsten disulfide nanosheets based-LFIA,WS2-LFIA)的建立及性能评价。通过超声剥离和差速离心策略建立了三种不同尺寸和厚度的WS2纳米片(L-WS2,M-WS2,S-WS2)。随后,由于它们良好的颜色强度和生物相容性,这三种尺寸的WS2纳米片分别作为LFIA中新的信号标签。在最佳条件下,这三种传感器都表现出显著的特异性,并成功地应用于牛肉、鸡肉和牛奶样品中TET的加标检测,其回收率为80.5%~116.61%。其中,L-WS2-LFIA检测的灵敏度略高于M-WS2-LFIA和S-WS2-LFIA。L-WS2-LFIA的LOD为0.019 ng/mL(线性范围为0.012~6 ng/m L),比AuNPs-LFIA的低49.6倍,与第二章的基于RAl NS-FLFIA检测TET的结果相比,L-WS2-LFIA,M-WS2-LFIA和S-WS2-LFIA的灵敏度分别提高了2.7倍,1.8倍和1.5倍。
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