【摘 要】
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新城疫（Newcastle disease,ND）是对畜禽危害最大的A类传染病之一,它是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的一种急性高度传染性的疾病。F蛋白是NDV主要的免疫保护性抗原和致病相关性抗原,在机体产生保护性抗体和免疫应答的过程中有重要作用。目前,F蛋白已成为人们研究ND疫苗的首选抗原。近年来,还发现粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Granulocy
【基金项目】
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国家自然科学基金（31270143）《表达 IBDV 主要保护性抗原的重组杆状病毒构建及其作为疫苗的免疫效果研究》
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新城疫（Newcastle disease,ND）是对畜禽危害最大的A类传染病之一,它是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的一种急性高度传染性的疾病。F蛋白是NDV主要的免疫保护性抗原和致病相关性抗原,在机体产生保护性抗体和免疫应答的过程中有重要作用。目前,F蛋白已成为人们研究ND疫苗的首选抗原。近年来,还发现粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte maerophage colony stimulating factor,GM-CSF）作为一种有效的免疫刺激因子,可调节和增强DNA疫苗的免疫效果,但是鸡GM-CSF对NDV疫苗的免疫增强作用研究鲜有报道,本研究拟进一步探讨鸡GM-CSF对NDV疫苗的免疫调节作用。本文以鸡免疫刺激细胞因子GM-CSF和NDV F抗原为目的基因,分别克隆至具有人巨细胞病毒立即早期启动子（Human cytomegalovirus immediate early promoter,CMV）、截断型水泡型口膜炎病毒糖蛋白（Truncated vesicular stomatitis virus G protein,VSVGED）、土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件（Wood-chuck hepatitisvirus post-transcriptional regulatory element,WPRE）和腺病毒末端反向重复序列（Adeno-associated virus inverted terminal repeats,ITRs）等调控元件的假型杆状病毒转移载体p LMI中,通过Bac-to-Bac系统获得重组Bacmid DNA,将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-LMI-F和BV-LMI-GM-CSF。利用获得的重组杆状病毒BV-LMI-GM-CSF作为免疫佐剂与杆状病毒BV-LMI-F联合免疫鸡体,使其有效地刺激机体产生特异性保护抗体和较强的细胞免疫应答,比较分析鸡GM-CSF作为免疫刺激因子对NDV疫苗免疫效果的影响,为增强NDV保护性抗原蛋白免疫效果奠定基础。BV-LMI-F与BV-LMI-GM-CSF重组杆状病毒以不同组合分别免疫SPF鸡,并设置商品化疫苗、空载体对照组和PBS对照组。免疫试验结果显示:F+GM-CSF共免疫组免疫保护率最高达100%,F单独免疫组免疫保护率达到87.5%,而对照组免疫保护率仅达到12.5%,各组间差异显著（p<0.05）。说明重组杆状病毒疫苗可以刺激机体产生有效的免疫应答,且GM-CSF作为免疫刺激因子可以增强疫苗的免疫效果。利用ELISA试剂盒检测不同免疫天数鸡血清中Ig G、IL-2、IL-4和IFN-γ含量。在56天时,F单独免疫组和F+GM-CSF共免疫组血清中Ig G（1.70 VS1.93）、IL-2（69.45 ng/m L VS 73.67 ng/m L）、IL-4（129.59 ng/m L VS 137.50 ng/m L）和IFN-γ（65.30 ng/m L VS 69.15 ng/m L）的含量均达到最大,且两组间差异显著（p<0.05）。同时检测免疫血清中的中和抗体水平,在42天时,F+GM-CSF共免疫组抗体水平（1:1532）达到最高,与F单独免疫组抗体水平（1:1317）差异显著（p<0.05）。此外,利用流式细胞仪检测了免疫鸡血液中CD4+和CD8+T细胞的含量。在56天时,F单独免疫组和F+GM-CSF共免疫组CD4+T细胞含量达到峰值,分别达到13.56%和15.66%,两组间差异显著（p<0.05）;F单独免疫组和F+GM-CSF共免疫组CD8+T细胞含量差异不显著（p>0.05）。以上结果均表明重组杆状病毒疫苗能刺激鸡体产生较强的体液免疫与细胞免疫应答,GM-CSF作为免疫佐剂可提高疫苗的免疫效果。本研究表明鸡GM-CSF具有良好的佐剂活性,是一个有潜在应用前景的免疫佐剂,为研制新型新城疫疫苗开创了新思路。
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