哺乳动物生物反应器的研究己经取得了很大成就,目前,科学家己经建立牛、羊等生物反应器来生产外源蛋白。鸡输卵管生物反应器目前已成为继哺乳动物乳腺生物反应器后最具开发前景的动物生物反应器,一旦有突破性进展,将可利用其获得大量有价值而廉价的蛋白。卵清蛋白是蛋清中含量最高的蛋白,它的5’端调控成分具有组织特异性,并受到激素的诱导,被几乎所有的研究者所利用。其中上游载体的构建首要条件,实现外源基因在家鸡输卵管组织中的特异性表达必须有组织特性启动子的参与。本实验利用以上原理,构建了鸡卵清蛋白5’端调控区调控人促红细胞生成素和绿色荧光蛋白的共表达载体,以绿色荧光蛋白基因作为报告基因指示外源基因的表达。本实验主要从以下几个方面进行研究。1鸡输卵管5’端调控序列和hEPO的克隆本实验从蛋鸡输卵管基因组DNA中扩增出约1.3kb的卵清蛋白5’端调控区（OV）,并从phEBS-HB质粒中扩增出人促红细胞生成素（hEPO）基因组DNA,将两者分别亚克隆入pGEM-T Easy载体,分别命名为pOV-T和phEPO-T,经酶切和测序鉴定正确。2中间载体pEGFP-hEPO和特异性表达载体pOV-GFP-hEPO的构建从phEPO-T上切下hEPO片段,将其亚克隆入pEGFP-C1载体的多克隆位点,命名为pEGFP-hEPO,经酶切鉴定正确。最后从pOV-T上切下启动子OV片段,将其亚克隆入经Ase I和Vsp I双酶切的切口处,替换掉CMV启动子,经酶切鉴定正确,成功构建了鸡卵清蛋白5’端调控区调控人促红细胞生成素的共表达载体pOV-GFP-hEPO。3三种表达载体在鸡原代输卵管上皮细胞中的表达以鸡原代输卵管上皮细胞为检测平台,采用脂质体转染法分别将上述两种重组质粒、pEGFP-C1质粒（阳性对照）及阴性对照转染鸡原代输卵管上皮细胞,并用激素诱导生长。用荧光倒置显微镜观测绿色荧光蛋白的表达。结果表明,共表达载体pOV-GFP-hEPO能够在鸡输卵管上皮细胞定位表达,其它两种载体在鸡原代输卵管上皮细胞中也能表达但表达效果不同。在转染48h时,三种载体的GFP阳性细胞表达数目都达到最高；用Image-Pro Plus 6.0 Analysis Software分析荧光照片,发现阳性对照的荧光强度即表达量最高,pEGFP-hEPO次之,pOV-GFP-hEPO最小。总之,pOV-GFP-hEPO的成功构建,为制备生产人促红细胞生成素的鸡输卵管生物反应器奠定了基础。