论文部分内容阅读
本试验通过RT-PCR 方法,克隆到了番茄果实蔗糖磷酸合成酶(SPS)基因全长cDNA,在GenBank 中的登记号为AY726439。并以自交系T6为材料,对番茄的遗传转化体系进行了优化,通过农杆菌介导法,将甜瓜果实反义酸性转化酶基因转化番茄,得到了卡那霉素抗性苗,具体的研究结果如下: 用异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法,提取番茄自交系20-19果实总RNA。经测定表明,所提RNA无降解,纯度高,符合实验要求。根据GenBank中已登记的番茄、马铃薯等蔗糖磷酸合成酶基因的保守序列设计特异引物,通过RT-PCR 方法,从番茄自交系20-19 果实总RNA 中克隆到目的片段,将其克隆入T 载体进行测序,结果表明该片段为目的基因的全长cDNA,长3373bp,编码区序列长3162 bp,编码1054 个氨基酸。序列分析表明,它与GenBank 中登记号为AB051216 的番茄蔗糖磷酸合成酶基因高度同源,核苷酸序列的同源性为98%。与其它几个种的同源性比较表明,所克隆的番茄SPS 基因核苷酸序列与GenBank 中登记号为X73477 的马铃薯的同源性为96%,与登记号为AF194022 的普通烟草的同源性为92%,与登记号为AF439861 的甜薯的同源性为82%。该基因已在GenBank 中注册,登记号为AY726439。通过番茄遗传转化体系的优化试验,确定番茄自交系T6 种子消毒方法为先用酒精处理30 秒,再用0.7% NaCLO(有效氯含量)处理20 分钟,最佳的愈伤组织诱导及不定芽分化培养基为MS+ZT2.0 mg/L +IAA0.5 mg/L,最佳的生根壮苗培养基为MS+IAA0.5 mg/L,最适合做转化的外植体为子叶,卡那霉素的最终筛选浓度为50mg/L。采用农杆菌介导法,将甜瓜果实反义酸性转化酶基因转化番茄自交系T6,得到了卡那霉素抗性苗。