Mcts2基因在小鼠胚胎中的表达及RNAi相关实验研究

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xynady
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Mcts2基因是一个发现于2007年的印记基因,位于小鼠2号染色体上,它的产生源于逆转录转座作用。同时它也位于另一个印记基因 H13的第四内含子中,根据已经公布的数据显示,Mcts2基因是一个在小鼠中父本等位基因表达而母本等位基因发生印记的基因,而且在其配子形成时期 Mcts2基因的启动子区发生了甲基化。在本研究中,我们主要从两个方面对 Mcts2基因做了分析,首先我们分析了Mcts2基因在小鼠胚胎发育过程中的表达情况,然后我们又应用RNAi实验技术探索性的分析了Mcts2基因和H13基因是否存在表达上的相互作用。  在Mcts2基因的表达分析中,原位杂交的实验结果表明Mcts2基因是一个在小鼠胚胎发育过程中,持续并且广泛表达的一个基因。Northren印记实验技术也被应用来分析 Mcts2基因在新生小鼠的五个主要脏器:脑、心脏、肺脏、肝脏和肾脏中的表达情况,结果显示 Mcts2基因在新生小鼠的这五个主要脏器中都有表达,而且表达量几乎相同。在本研究中我们还应用了实时定量RT-PCR技术,来进一步分析 Mcts2基因在小鼠胚胎的这五个主要脏器的形成和分化过程中的表达情况。我们选取的胚胎为发育到12.5天、15.5天和18.5天的胚胎。结果显示Mcts2基因在这三个胚胎发育的重要时期的这五个重要脏器中的表达也是广泛而且持续性的,而且我们发现Mcts2基因的表达信号在E15.5胚胎中最为强烈。在本研究中我们还应用了 RNAi技术来探索 Mcts2基因与H13基因之间的表达相关性,我们使用了shRNA的高表达载体,针对Mcts2基因我们设计了4个siRNA片段,但是这四个siRNA并没有在RNA水平上沉默Mcts2基因的表达。  综上结果,Mcts2基因在小鼠胚胎发育的过程中主要时期以及重要脏其中都有广泛而且持续的,所以我们推测该基因在小鼠胚胎发育过程中起着重要的作用。但是,Mcts2基因与H13基因的表达相关性至今也没有被证明。
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