玉米穗发育关键因子FEA4的反式调控初步解析

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玉米是我国重要的粮食作物,也是基础遗传研究模式作物之一,且社会需求量仍处于持续增加的状态。玉米穗型很大程度上影响着产量,而穗形态建成受到顶端花序分生组织发育的深度调控。因此,研究穗发育的遗传及分子调控一直是玉米分子育种的重要基础。前人研究报道一个TGA类bZIP转录因子FEA4(FASCIATED EAR4)在调节玉米茎尖分生组织和花序分生组织生长发育中起关键作用。引起我们关注的是,FEA4在茎尖分生组织中主要表达于周边区,而在花序分生组织中主要富集于顶端区。为探究FEA4时空表达特异性及其调控穗发育的分子基础,本研究通过酵母单杂交的方法筛选调控FEA4表达的反式作用因子,并初步鉴定其生物学功能。同时我们利用CRISPR/Cas9技术对FEA4启动子包含的不同motif区段进行编辑,结合FEA4表达量检测、穗形态表型考察以及单穗产量统计,以期创制有应用潜力的新种质资源,为后期分子育种提供新的材料基础。已有研究结果如下:1.通过酵母单杂筛选出两个候选转录因子ZmbHLH172和ZmOFP28,可与FEA4特定启动子区段结合。并进一步利用玉米体内原生质体双荧光素酶活性测定实验,验证了两候选因子可结合于FEA4启动子区段并影响其表达。表达分析表明ZmbHLH172在雌穗的顶端、成对小穗分生组织中特异表达,其表达模式与FEA4基本相似;ZmOFP28在两个小花分生组织的中间区域特异表达,其表达方式不同于FEA4的表达模式。2.候选转录因子生物学功能初步探索:利用CRISPR/Cas9技术对ZmbHLH172和同源基因GRMZM2G093744及ZmOFP28基因编码区进行编辑。目前仅ZmOFP28获得编辑植株,包含4种不同类型的缺失、插入的编辑情况。将用于后期生物学功能和遗传互作等研究。3.利用CRISPR/Cas9技术改造FEA4启动子,获得了包含缺失、倒置及插入的13种不同类型的编辑情况。目前这些材料还在纯合过程中,后期将用于鉴定FEA4表达量及相应穗型和农艺性状等相关工作。综上所述,我们初步得出ZmbHLH172和ZmOFP28可能参与调控了FEA4表达,为后续研究FEA4调控穗发育的分子调控机理提供了研究基础;利用CRISPR/Cas9技术改造FEA4启动子,获得不同类型的有益等位基因,以期为后期分子育种提供有应用价值的种质资源。
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