兰科植物作为一种重要的植物资源,具有巨大的经济价值和科研价值。由于人为过度采集、生境的破坏和丧失,野生兰科植物资源日趋濒危。菌根真菌对于自然状态下兰科植物完成正常的生活史具有不可替代的作用,因此从菌根真菌的角度研究珍稀濒危兰科植物的保育十分必要,将菌根技术应用于濒危兰科植物的保育将成为一项关键的技术。为探索菌根技术在兰科植物保育中的应用,解决濒危兰科植物在人工栽培中的关键问题。本研究采用菌根技术与组培技术相结合的手段,以野生五唇兰为材料(Doritis pulcherrima Lindl.),从野生五唇兰根系中分离获得真菌,通过建立五唇兰组培苗与真菌的共生培养体系,筛选与五唇兰有效共生并能明显促进其生物量增长的优良菌株。在纯培养和盆栽条件下,用筛选出来的真菌对五唇兰进行接种,从真菌的处理、菌根染色、真菌的重分离、五唇兰植株生物量的增长等方面研究菌根化育苗技术体系。主要研究成果如下:1)建立了五唇兰种子非共生萌发及种苗扩繁技术体系。种子非共生萌发的最适培养基为花宝1号3 g/L +马铃薯30 g/L +蛋白胨0.5 g/L ;分化苗最适的继代培养基为MS +香蕉70 g/L +蛋白胨1 g/L +活性炭1 g/L ;在MS +椰子汁100 ml/L + BA 5 mg/L + NAA 0.5 mg/L培养基上,以五唇兰组培苗茎段诱导丛生芽增殖,可获得高达5倍的增殖;组培苗经过15～20天的炼苗,以苔藓为基质,移栽成活率达85﹪。2)摸索出一套兰科菌根真菌获取的有效程序。采用75﹪酒精擦拭根表面,0.1﹪HgCl2消毒8 min的消毒方式,以添加环境因子的PDA作为分离培养基可以获得较好的分离效果。从野生五唇兰的根中共分离得到83株真菌,经鉴定73个菌株录属于半知菌和子囊菌的17个属,10株为待鉴定的不产孢类。3)摸索出一条菌根真菌筛选的有效途径。以改良的DE培养基为共生培养基,建立五唇兰与菌根真菌适合的共生培养体系,通过测定五唇兰鲜重增长率和干物质含量,从分离的真菌中筛选出F29等5个能够显著促进组培苗生长的菌株。4)初步建立了五唇兰菌根化育苗技术体系,实现了五唇兰瓶内和盆栽菌根化育苗。利用固体培养的菌丝体对无菌组培苗进行瓶内菌根化培养,真菌与苗共生培养15 d后,通过菌根染色法,表明真菌能够成功侵染植株的根。菌根化苗的移栽成活率均达到100﹪(对照为63.33﹪),培养90 d后,各菌株处理苗的鲜重增长率均高于对照,其中F29菌株处理苗的鲜重增长率比对照高出31.3﹪。利用液体菌剂对盆栽苗进行菌根化培养,90 d后,各菌株处理苗的成活率和鲜重增长率均高于对照,其中F29菌株处理苗的成活率比对照高出35﹪,鲜重增长率比对照高出33.24﹪,差异均达到极显著。在各菌株处理苗的新生营养根中均分离获得了原接种菌株。