孕酮对体外三维立体培养的人子宫内膜细胞胞饮突形成的影响

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目的分离纯化人子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞及间质细胞,建立体外子宫内膜细胞的三维立体培养模型,利用该模型进行胚胎植入及子宫内膜容受性机制的研究,观察不同浓度孕酮对体外三维立体培养的人子宫内膜上皮细胞胞饮突形成的影响,为临床体外受精—胚胎移植后黄体期孕酮补充剂量的选择提供理论依据。方法选取2006年3~6月份因子宫肌瘤在中国医大盛京医院行全子宫切除术及次全子宫切除术的妇女,年龄20~45岁、月经周期规律(24~35天)、术前3个月内无激素应用史,增生期子宫内膜(月经7~14天),术后经病理证实且内膜无病变。子宫离体后,立即在手术室,无菌条件下用刮匙刮取子宫内膜,消化后筛网分离取得上皮细胞和间质细胞,然后利用其不同贴壁时间进行纯化,培养3~5天后,将其三维立体培养,培养物分三层,最底层为胶原与间质细胞混合物,其上为一薄层Matrigel胶,最上层为腺上皮细胞,培养重建子宫内膜,培养液中给予不同浓度的孕激素,10-8 mol/L、10-7 mol/L,不加孕激素做阴性对照,雌激素浓度均为10-9mol/L,光镜下观察细胞三维结构,扫描电镜观察细胞表面形态及胞饮突形成情况,透射电镜观察细胞超微结构。结果分离纯化后原代培养的子宫内膜上皮细胞呈旋涡状生长,其纯度达92%,子宫内膜间质细胞呈梭形生长,纯度可达95%以上;光镜下见三维培养的腺上皮细胞单层柱状生长,细胞有极性,间质细胞于其下散在生长;扫描电镜可见上皮细胞融合,加孕激素上皮表面可见胞饮突结构,不加孕激素未见胞饮突形成,不同浓度孕激素胞饮突形成数目无明显差异,均覆盖细胞表面积的5%左右,透射电镜超微结构可见腺上皮细胞间紧密连接与缝隙连接及桥粒连接,并可见细胞内粗面内质网及胞质内丰富的分泌颗粒。结论人子宫内膜上皮细胞及间质细胞分离效果好,细胞纯度高,利用增殖期的子宫内膜上皮细胞及间质细胞体外培养可以建立子宫内膜的三维立体模型;证明了胞饮突形成依赖孕激素的作用;而且孕激素诱导胞饮突形成具有饱和作用,高于阈浓度的孕激素,并不增加胞饮突的形成。
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