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山羊腹泻是山羊以拉稀为主要临床症状的一类疾病的总称,7日龄以内的羔羊表现最为严重,多种因素可以引起山羊腹泻,其中细菌性腹泻最常见,主要病原菌有产肠毒素大肠杆菌、沙门菌、志贺菌和奇异变形杆菌等。以上单一病原菌可以引起山羊腹泻,但常见多种病原菌混合感染。对引起山羊腹泻的重要病原菌尽早做出准确检测,并采取有效的预防和治疗措施是控制本病的关键。本研究首先建立同时检测产肠毒素大肠杆菌、沙门菌、志贺菌和奇异变形杆菌这4种病原菌的多重PCR方法,并用该方法对从四川部分地区采集的山羊肛拭子样本进行检测,同时分离鉴定4种病原菌,研究分离菌的耐药性,为山羊细菌性腹泻的药物防治提供参考;研究山羊源志贺菌的主要生物学特性,丰富其病原学研究资料。研究结果如下:（1）山羊腹泻4种病原菌多重PCR方法的建立及应用本研究针对产肠毒素大肠杆菌（ETEC）K99基因,沙门菌invA基因,志贺菌侵袭性质粒H ipaH基因和奇异变形杆菌ureR基因设计4对特异性引物,通过引物浓度和退火温度的优化,确定最佳引物浓度、退火温度、反应体系和反应条件,通过特异性、敏感性和重复性评价,建立同时检测引起山羊腹泻的4种主要病原菌的多重PCR方法,并应用该方法检测山羊粪便样品。结果显示多重PCR扩增目的条带大小与预期片段大小相符;对魏氏梭菌等6种肠道细菌均无扩增,表明该方法特异性好;该方法对ETEC、沙门菌、奇异变形杆菌和志贺菌检测的敏感性分别为103 CFU/mL、102 CFU/mL、102 CFU/mL和103 CFU/mL;该方法稳定性和重复性好;应用建立的多重PCR方法对21份山羊腹泻临床样品的检测结果与细菌分离鉴定结果一致,无漏检。本研究建立了特异、灵敏和重复性好的检测山羊腹泻4种病原菌的多重PCR方法,为山羊腹泻4种病原菌的快速检测提供了可靠的检测手段。（2）山羊腹泻4种病原菌的多重PCR检测、分离鉴定及耐药性检测本研究采用已建立的多重PCR方法对158份山羊腹泻肛拭子和68份健康肛拭子提取的DNA进行检测,并对多重PCR检测阳性的样本进行4种病原菌的分离鉴定,同时分析分离菌株对18种常用抗菌药物的敏感性。结果ETEC、沙门菌、志贺菌和奇异变形杆菌在158份腹泻样本中的多重PCR检出率分别为69.6%（110/158）、21.5%（34/158）、41.8%（66/158）、17.8%（28/158）;在68份健康样本中的检出率分别为22.0%（15/68）、11.7%（8/68）、0%（0/68）、11.7%（8/68）。细菌分离鉴定结果显示,158份腹泻样本中,ETEC分离率为58.8%（93/158）,沙门菌分离率为15.2%（24/158）,志贺菌分离率为34.2%（54/158）,奇异变形杆菌分离率为11.0%（17/158）;68份健康样本中,ETEC分离率为16.1%（11/68）,沙门菌分离率为11.7%（8/68）,奇异变形杆菌分离率为8.8%（6/68）,健康样本中没有分离到志贺菌。腹泻样本中4种病原菌的PCR检出率和分离率都高于健康样本,其中腹泻样本的ETEC和志贺菌多重PCR检出率和分离率极显著高于健康样本,由此可以推断ETEC和志贺菌是引起四川部分地区山羊细菌性腹泻最主要的病原菌。药敏试验结果表明,4种病原菌对18种常用抗生素耐药性都十分严重,最多为14重耐药,4种病原菌仅对头孢噻肟、大观霉素、丁胺卡那、头孢拉定4种抗生素共同高度敏感,4种病原菌对其余14种抗菌药物呈不同程度的耐药。（3）山羊源志贺菌的血清型鉴定、毒力基因检测及其对小鼠的致病性对分离鉴定的54株山羊源志贺菌进行血清学分型;PCR检测其携带的,sat、sen、setA、pic、sigA、icsP、ial、iusA、iutA、ipaH共10个毒力基因的情况;对携带毒力基因最多的优势血清型菌株采用灌胃法检测其对BALB/c小鼠的致病性。结果54株山羊源志贺菌均为福氏志贺菌,其中4株为福氏1 a血清型,11株为福氏1 b血清型,28株血清型为福氏2 b血清型,11株血清型为福氏3 b血清型,其中福氏2 b血清型为优势血清型。54株志贺菌均100%携带sat、sen、ipaH基因,而setA、pic、sigA、icsP、ial、iusA、iutA基因的携带率分别为73.6%、65.2%、65.2%、77.8%、82.0%、79.1%、79.1%;54株山羊源志贺菌中,最少携带4个,最多携带所有检测的10个毒力基因。携带10个毒力基因的4株福氏志贺菌2b优势血清型菌株均在1.7×108 CFU/mL灌胃剂量下致死全部试验小鼠,其中福氏志贺菌SWUN553对BALB/c小鼠灌胃的LD50为1.04×106 CFU。福氏志贺菌SWUN553致死小鼠的组织病理学显示试验小鼠心、肝、脾、肺、结肠出现明显的坏死与炎性细胞浸润等病变,回肠的粘膜下层有轻微的炎性细胞浸润,肠道中结肠病变最为严重,提示结肠为该菌入侵的最可能部位。