新型VEGF基因涂层支架改善再内皮化和预防支架内再狭窄的研究

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背景:心脑血管狭窄性疾病,如动脉粥样硬化导致的血液循环不良、心绞痛、缺血缺氧、脑卒中和心肌梗死等,已经成为人类最具威胁的疾病之一。血管内支架植入术是能够有效改善和治疗血管内狭窄的良好措施。但是,支架内再狭窄(in-stent restenosis,ISR)是目前支架植入术临床实践中常见的问题,严重影响了支架植入患者的愈后。研究表明促进支架再内皮化是防治ISR的潜在治疗方法之一。因此我们希望通过利用一种新型的阳离子聚合物基因载体SKP携载VEGF基因,将其涂敷到支架表面,通过支架植入术将VEGF基因转染到支架植入术后损伤的血管,从而达到促进损伤血管的再内皮化,抑制ISR形成的目的。方法:1.制备SKP/pVEGF基因涂层支架:首先在金属裸支架表面浸涂一层聚多巴胺(polydopamine,PDA),使支架表面形成一层负电荷,有利于带正电荷的阳离子聚合物-DNA复合物黏附。然后通过静电吸附作用将预先混合孵育的阳离子聚合物超支化多聚赖氨酸(SKP)和VEGF质粒(pVEGF)溶液涂敷到PDA包裹的支架表面,形成SKP/pVEGF支架。前期体外试验已经证实SKP是一种具有良好生物相容性和促进基因转染能力的阳离子聚合物基因载体。同时也将SKP和空白质粒(NC)制成SKP/pNC支架作为阴性对照。2.动物实验:30只体重在2.5kg左右的日本大耳白兔随机分成3组,分别为SKP/pVEGF涂层支架组,SKP/pNC涂层支架组和裸金属支架(bare metal stent,BMS)组,每组 10 只。通过血管造影(Digital subtraction angiography,DSA)将各组支架分别植入到兔腹主动脉的合适位置。术后第7天和28天时每组各处死5只兔子,取支架植入段动脉组织进行后续检测。pVEGF的转染和表达用Western Blot(WB)和VEGF免疫组织化学方法检测。支架再内皮化程度则通过扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)和CD31免疫组化确认。包含金属支架的动脉组织用甲基丙烯酸甲酯包埋进行硬组织切片,H&E染色后,光镜下观察测量支架内新生内膜的面积,评估再狭窄的程度。结果:所有兔子都成功进行了支架植入手术。术后1周的WB和VEGF免疫组化证实SKP/pVEGF组织中存在VEGF蛋白过表达现象,表明SKP/pVEGF支架植入兔子腹主动脉后成功转染pVEGF并使周围组织实现VEGF蛋白的过表达。SEM观察内皮细胞显示1周时SKP/pVEGF组支架表面基本覆盖,而另两组则尚未覆盖完全。4周时三组支架表面均被覆盖,但是SKP/pVEGF组相较于其它组表面更规则、光滑。CD31免疫组化结果也显示在1周和4周SKP/pVEGF组都具有更快速、更完整、更光滑的内皮细胞覆盖。形态学分析测得的三组新生内膜面积在一周时无显著性差异,4周时测得的数据分别为SKP/pVEGF支架为0.353±0.070 mm2,SKP/pNC 支架组为 0.706±0.137 mm2,BMS 为 0.615±0.078 mm2,P<0.05。结果表明对照组新生内膜增生更明显,更易发展形成ISR。结论:SKP/pVEGF涂层支架具有改善支架内皮化,抑制支架内再狭窄的作用。
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