金黄色葡萄球菌是一种常见的病原菌,目前已对多种抗生素产生了抗药性。寻找新的抗金黄色葡萄球菌的物质,已成为医学和微生物学的一个重要课题。本实验室前期研究发现多粘类芽胞杆菌分泌物对金黄色葡萄球菌有抑制作用。多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)是类芽孢杆菌属中的一种革兰氏阳性菌,由于其产生的多种次生代谢产物具有抑菌、防腐作用,近年在植物病虫害防治和抗生素分离研究方面受到了很大关注。本实验从多粘类芽孢杆菌J株培养物中,通过柱层析、高效液相等方法分离纯化出了一种活性物质,其对耐药性的金黄色葡萄球菌(MRSA)有明显的抑杀作用。再通过后续的质谱、核磁共振等实验确定出了该抑菌物质主要是两种分子量为414.5的非多肽类、容易相互转化的类似物。另一方面,在抗生素的后期分离纯化中,由于抗菌物质在溶液中含量低,对其抗菌活性跟踪极其困难。为了解决该问题,构建了一个沙门氏菌的毒性因子启动子-LuxCDABE报告子库。构建好的报告子菌株库,通过药物刺激其Lux发光情况的变化,可以用来检测低浓度的药物存在或者研究药物对启动子对应的毒性因子的影响。这种检测具有高灵敏、高通量、实时快速、重复性好的特点。研究挑选了沙门氏菌(Salmonella typhimurium LT2)的47个毒性因子,并扩展出了它们各自的启动子区域,将其连接到了一个质粒载体pCS26上,该质粒含有未带启动子的发光报告基因LuxCDABE。连接后的启动子-LuxCDABE报告子质粒,经多种方法验证后最终转回到了沙门氏菌中。构建好的启动子-LuxCDABE报告子可以用来检测浓度很低的多粘类芽孢杆菌抗性提取物：经柱层析纯化后的抗菌物稀释1000倍左右,对构建好的四株菌的发光有明显的减弱作用,但却不影响沙门氏菌的生长。由于多粘类芽孢杆菌抗性物质在高效液相单峰回收液中含量极低,常规的抑菌圈检测法很难满足需求,操作复杂。高灵敏度的启动子-LuxCDABE发光检测法可以很灵敏地检测出该物质的存在。此外,该毒性因子启动子库可以用来研究沙门氏菌的致病因子,而致病因子又是新的抗菌靶位。