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目的1、通过基因检测,了解PDAC病人中ErbB3的突变情况。2、构建ErbB3突变型质粒。3、了解ErbB3的激活与过度表达与EGFR靶向治疗的关系。4、初步探索ErbB3的激活和过度表达与EGFR靶向治疗相互作用的机制。方法1、搜集长征医院140例PDAC病人临床资料及胰腺癌标本,运用二代基因检测法进行ErbB3的突变检测。2、利用定点突变法构建ErbB3基因A232V、H465P点突变。3、构建含目的基因的质粒,确定是否直接与靶基因结合,运用聚合酶链式反应(PCR)检测转染效率。4、运用四唑盐(MTT)比色计数实验了解厄洛替尼加入后对ErbB3野生型及突变型细胞株KP4、PANC-1增殖的影响。5、运用Transwell细胞体外侵袭实验了解厄洛替尼加入后对ErbB3野生型及突变型细胞株KP4、PANC-1迁移的影响。结果1、通过对140例标本进行ErbB3基因检测,发现1例同义突变,突变位点为498位,密码子AAA→ATA,赖氨酸→异亮氨酸,PPH2 Score HumDiv为0.027分,HumVar为0.048分,预测结果均为BENIGN,SIFT Score为0.18分,预测结果为TOLERATED;一例错义突变,突变为465位点密码子CAC→CCC,组氨酸→脯氨酸,PPH2Score HumDiv为1分,HumVar为1分,预测结果均为PROBABLY DAMAGING,SIFT Score为0分,预测结果为DAMAGING。2、PCR扩增突变基因片段成功:以cDNA为模版,PCR分别扩增出A232V和H465P ErbB3基因片段;ErbB3点突变质粒构建成功:通过PCR、挑菌摇菌、提质粒成功获得了ErbB3基因A232V和H465P两个点突变质粒,送质粒进行测序鉴定后,结果显示构建成功。3、未转染ErbB3突变质粒的KP4细胞系中,加入厄洛替尼后细胞活性相较对照组略下降,但下降并不明显;转染A232V的KP4细胞系中,加入厄洛替尼后,细胞增殖活性明显下降,且在前12h内下降最明显;转染H465P的KP4细胞系中,加入厄洛替尼后,细胞增殖活性下降,前12h下降幅度相对稍大,后续作用较弱。总体而言在KP4细胞系中,A232V较H465P对厄洛替尼更为敏感,ErbB3突变相较于未转染突变质粒KP4细胞系,厄洛替尼对胰腺癌细胞的抑制作用较大(P<0.05)。在未转染ErbB3突变质粒PANC-1细胞系中,加入厄洛替尼后细胞活性相较对照组并未下降,甚至在24h检测时发现增殖活性增强;转染A232V、H465P的PANC-1细胞系中,加入厄洛替尼后,胰腺癌细胞的增殖活性都有所下降,但下降幅度均较小,转染H465P的PANC-1细胞系增殖活性总体较A232V弱(P<0.05)。4、加入厄洛替尼组相较对照组,肿瘤细胞KP4和PANC-1的迁移能力明显减弱。在KP4细胞系中,转染A232V组加入厄洛替尼后,平均每个视野迁移的细胞数是81.5±0.5,对照组为297.7±3.0(P<0.05);转染H465P组加入厄洛替尼后,平均每个视野迁移的细胞数是85.5±1.3,对照组为197.7±4.4(P<0.05)。在PANC-1细胞系中,转染A232V组加入厄洛替尼后,平均每个视野迁移的细胞数是81.3±0.7,对照组为295.4±2.9(P<0.05);转染H465P组加入厄洛替尼后,平均每个视野迁移的细胞数是96.4±3.7,对照组为313.8±2.1(P<0.05)。5、转染ErbB3突变质粒A232V的KP4细胞系中,加入厄洛替尼后细胞增殖活性相较对照组明显下降;在厄洛替尼中加入SSI后,厄洛替尼对细胞系的抑制作用明显减弱,相较于单独加入厄洛替尼,细胞的增殖活性明显增强;单独加入SSI对细胞的增殖活性无明显作用,相较于对照组变化不大。6、厄洛替尼+SSI组中,平均每个视野迁移的细胞数是262.2±5.8;单独加入厄洛替尼组中,平均每个视野迁移的细胞数是78.2±1.8;单独加入SSI组中,平均每个视野迁移的细胞数是294.8±6.2;对照组中,平均每个视野迁移的细胞数是301.5±8.5(P<0.05)。结论1、胰腺癌中存在ErbB3同义突变及错义突变,错义突变率较低。2、厄洛替尼对ErbB3突变型胰腺癌细胞系增殖有抑制作用,其中对A232V KP4细胞系抑制作用较强。3、厄洛替尼对ErbB3突变型胰腺癌细胞系迁移有抑制作用。4、ErbB3在胰腺癌中的作用与HRG密切相关,EGFR靶向药物厄洛替尼对突变型胰腺癌的抑制作用在一定程度上与ErbB3/HRG轴相关。