花生是我国重要的油用兼食用经济作物,在人民生活和国民经济中占据重要地位。由黄曲霉菌引起的花生黄曲霉毒素的污染,严重影响了花生的生产、贸易和食品安全,解决花生黄曲霉污染已成为刻不容缓的重要科学问题。目前国内外对花生抗黄曲霉的分子机理研究甚少,对控制黄曲霉的抗性基因数目、作用机制、花生-黄曲霉菌互作的机理还不清楚,使培育抗黄曲霉花生品种进展缓慢。本研究旨在明确黄曲霉侵染对花生果皮基因表达谱的影响,明确抗黄曲霉相关NBS-LRR基因AhRAF27基因的表达特征,并对其蛋白质产物进行亚细胞定位分析,为阐明花生抗黄曲霉菌的分子机理及通过基因工程方法改良花生对黄曲霉菌的抗性奠定基础。主要研究结果如下:1.本研究是在前期研究获得的含有101,344条unigenes的高密度花生cDNA芯片（Roche NimbleGen基因表达芯片）基础上,通过比较黄曲霉与干旱共同处理、干旱处理与正常条件（对照）mRNA芯片杂交结果,分析花生接种黄曲霉菌前后果皮基因表达谱的差异。结果表明,接种黄曲霉菌后表达量上调3以上的基因有4,917个,表达量下调3倍以上的基因有5,055个。GO注释和KEGG pathway分析显示在接种黄曲霉菌前后,花生果皮中差异基因功能差异较大,参与的代谢途径差异基因较多。一些与抗病相关的重要基因如NBS-LRR类抗病基因、转录因子和激酶类基因在黄曲霉侵染前后表达有差异,这些基因的差异表达可能与黄曲霉侵染花生后的防御应答有关,因此可能与花生对黄曲霉病的抗性相关。从中选择了 44个NBS-LRR类基因进行进一步分析,发现有16个基因呈上调表达,28个基因呈下调表达,其中上调与下调表达量超过5倍的基因有18个。根据Blast2GO注释的结果,这些基因是抗性基因,因此我们推测这些基因可能与黄曲霉侵染相关。从这些基因中又选择了1 1个受黄曲霉诱导表达差异显著的基因进行RT-PCR验证,结果表明,RT-PCR结果与基因芯片分析结果基本一致。以上结果为解析花生抗黄曲霉菌的分子机理提供了基因资源。2.NBS-LRR类抗病基因是目前已知的在植物抗病防御反应中发挥关键作用的抗病基因家族基因。本研究通过基因芯片分析获得一个受黄曲霉诱导下调表达的NBS-LRR基因AhRAF27,对其蛋白质产物进行了亚细胞定位研究,对瞬间过量表达该基因的烟草的表型进行了分析。结果表明该基因表达产物分布于细胞质中,其在烟草中的瞬间过量表达不会引起烟草出现明显的过敏性反应。然而,对瞬间超表达该基因的烟草中R基因通道上重要标记基因的表达分析表明,该基因瞬间超表达可引起R基因通道上相关基因表达的变化。因此,推测该基因可能参与花生抗黄曲霉病的反应。