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根据本实验室确定的13条溶藻弧菌毒力菌株特异基因核心序列,首先设计了75条单侧寡聚核苷酸巢式PCR (single oligonucleotide nested PCR, SON-PCR)的单引物。通过SON-PCR反应条件的优化和扩增,成功获得了17条侧冀序列信息。本研究得到10条含核心序列全长基因的序列,分子量从1315bp至6740bp不等,名称分别为c26、H76、j2、j5、K35、m25、n4、t75、W90、和f26,并对其特异基因进行DNA序列分析和蛋白质分析。c26序列包含特异基因c26-ggdef全长序列,该基因编码GGDEF domain protein;H76序列包含特异基因H6-prs2全长序列,该基因编码磷酸核糖焦磷酸合成酶；j2序列包含特异基因j2-rcna全长序列,该基因编码nickel and cobalt efflux system; j5序列包含未知功能特异基因j5-vss (virulence strain-specific gene, VSS); K35序列包含特异基因K35-fmp和K35-vss全长序列,K35-fmp基因编码flagellar motor protein, K35-vss为未知功能基因；m25序列包含特异基因m25-fmp全长序列,该基因编码multidrug efflux transporter; n4序列包含特异基因n4-ivp和n4-vasd全长序列,n4-ivp编码ImpI/VasC protein, n4-vasd编码type VI secretion lipoprotein/VasD; t75序列包含特异基因t75-mfp全长序列,该基因编码membrane fusion protein。W90序列包含特异基因W90-flp部分序列,该基因编码type III secretion lipoprotein。f26序列中的核心序列不位于任何开放阅读框中。选择K35-vss做为原核表达的目的基因。设计带酶切位点的引物扩增出目的基因,双酶切后与质粒PTXB1构建重组质粒,转化至大肠杆菌ER2566, 0.1mmol/L IPTG于12℃诱导10h后,形成大量目标蛋白包涵体；采用变性和复性得到的可溶性蛋白难以激活内肽酶活性,这可能是由于K35-vss蛋白自身结构决定的,建议改用基因敲除等其它方法研究该基因的功能。