单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes,简称单增李斯特菌）属于食源性致病菌,普遍存在于环境中,对人和动物均具有感染能力。单增李斯特菌可以产生多种毒力因子,其中具有溶细胞活性的溶血素（listeriolysin O,LLO）是主要的毒力因子,也被认为是鉴别致病性菌株与非致病菌株的依据。因此本研究以LLO为靶标,采用指数富集配基的系统进化技术（systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）筛选特异性识别LLO的ssDNA（single strand DNA）适配子,为建立单增李斯特菌的检测方法同时能识别致病菌株提供基础材料。主要研究内容如下所述。通过原核表达的方法获得单增李斯特菌的具有生物活性的溶血素。克隆溶血素编码基因hly,测序结果显示该基因全长1590bp,经BLAST比对,与已知hly序列相似性最高为99%。选择pET-30a（+）作为原核表达的载体,构建重组质粒p-hly,将重组质粒转化到Escherichia coli BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,表达重组蛋白以包涵体形式存在。通过对诱导条件进行摸索,结果显示最佳诱导条件为IPTG浓度0.5mmol/L,温度28℃,诱导10h。经超声破碎后从包涵体中提取溶血素,1L培养液得到6.774mg。溶血实验测得表达的溶血素LLO溶血活性为4.72×10~4HU/mg。以得到的溶血素作为靶物质,采用SELEX从ssDNA文库中筛选适配子,经过16轮筛选,ssDNA次级文库结合率趋于饱和,约为35.51%。将获得的适配子文库与载体p MD-19T连接,并转化E.coli DH5α,随机挑取其中39个阳性克隆子测序,结果显示ssDNA文库一定程度上得到富集,富集率最高的一组有7个克隆子序列一致（命名为适配子1）,其余四组中分别有4个克隆子（命名为适配子2）、3个克隆子（命名为适配子3）和2个克隆子（命名为适配子4）序列完全一致。DNAMAN进行二级结构预测显示,二级结构同一级结构密切相关。选择适配子1及适配子2进行特异性的测定,发现适配子1能够特异性识别单增李斯特菌,由此得到与溶血素特异性结合的适配子。