【摘 要】
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本文研究了硬脂酰鱼精蛋白的合成,并将其作为非病毒基因载体,考察了与质粒DNA的复合性能,复合物的体外基因转染效果。主要内容包括以下三部分:1)通过N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与
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本文研究了硬脂酰鱼精蛋白的合成,并将其作为非病毒基因载体,考察了与质粒DNA的复合性能,复合物的体外基因转染效果。主要内容包括以下三部分:1)通过N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与硬脂酸形成的活泼酯,在水性反应环境中与鱼精蛋白进行酯交换反应,从而将疏水性的硬脂酰基团偶联到鱼精蛋白上,成功合成了三种硬脂酰鱼精蛋白(stearyl protamine,简称SP),分别为SP1,SP2,SP3。将SP在HCl中降解后回收硬脂酸,并用酸碱微量滴定的方法测定含量。SP中硬脂酰基团的含量(质量百分比)分别为2.5%、3.0%、5.5%。通过动态光散射(DLS)对SP以及硫酸鱼精蛋白(PS)的研究发现,SP3可以在水中自组装形粒径110nm左右的稳定聚集体,此聚集体的粒径不随SP3浓度的提高而发生变化,说明是一种热力学稳定的自组装聚集体。2)通过工程菌扩增,碱法抽提,获得编码萤火虫荧光素酶的质粒DNA pGL3-control,并以此作为后继实验中采用的DNA材料。凝胶电泳阻滞实验检验SP对DNA的复合能力,结果表明当载体/DNA质量比超过1.0时,DNA均能被三种SP完全包装起来。与未修饰的鱼精蛋白相比,随着SP中硬脂酰基团含量的升高,其对DNA的复合能力略有减弱。对鱼
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