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目的:研究肝癌细胞系对TRAIL耐药的机制,探究ISG15及miR-138在TRAIL耐药机制中的作用,进一步提高TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:首先选取四种肝癌细胞系LH86、SMMC-7721、HLC-Z01、Huh7细胞,以不同浓度TRAIL(1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml)处理四种的肝癌细胞系(4h、6h、8h、12h),MTT实验检测细胞活力,筛选出对TRAIL敏感的肝癌细胞系及对TRAIL耐药的肝癌细胞系。通过定量PCR及western blot实验检测ISG15及miR-138在TRAIL敏感细胞及与TRAIL耐药细胞中的表达差异。利用真核载体构建及细胞转染技术在TRAIL敏感细胞中沉默ISG15且在TRAIL耐药细胞中过表达ISG15,通过western blot实验分析其对TRAIL诱导细胞凋亡的影响。通过TargetScan预测分析,ISG15可能是miR-138的靶基因。利用细胞转染技术在TRAIL敏感细胞及耐药细胞中过表达miR-138,通过定量PCR及western blot实验检测过表达miR-138对ISG15表达的影响,并通过western blot实验分析其对TRAIL诱导细胞凋亡的影响。结果:1.TRAIL有肝癌细胞凋亡的作用,LH86、SMMC-7721细胞对TRAIL敏感,Huh7、HLC-Z01细胞对TRAIL耐药。当TRAIL浓度为10ng/ml,处理时间为8h时效果最佳。2.在TRAIL敏感细胞中ISG15的表达水平较TRAIL耐药细胞低,而TRAIL敏感细胞miR-138的本底表达水平较耐药细胞高。3.在敏感细胞中过表达ISG15能抑制TRAIL诱导细胞凋亡的作用,相反,在耐药细胞中沉默ISG15能增强TRAIL诱导细胞凋亡的作用,提示ISG15在TRAIL诱导细胞凋亡的过程中起调控作用,能抑制细胞凋亡。4.在敏感细胞及耐药细胞中过表达miR-138能够抑制ISG15的表达,表明ISG15为miR-138的靶基因。5.在敏感细胞及耐药细胞中过表达miR-138能够增强TRAIL诱导细胞凋亡的作用。表明miR-138能调节TRAIL诱导细胞凋亡的作用。6.当同时过表达ISG15及miR-138时,TRAIL诱导细胞凋亡的效果较本底水平降低。表明miR-138是通过调控ISG15的表达增强TRAIL诱导细胞凋亡的作用。结论:1.ISG15在TRAIL诱导肝癌细胞凋亡过程中起重要的调控作用。2.miR-138通过调节ISG15的表达增强TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的作用。