目的:亚低温治疗可以增加脊髓对缺血、缺氧的耐受性,降低免疫反应及炎症反应,减少自由基的产生。大量的动物及临床实验都表明,亚低温可以促进急性脊髓损伤神经功能的恢复,改善预后。RhoA/ROCK信号通路作为神经轴突生长的“分子开关”。RhoA选择性抑制剂C3以及ROCK抑制剂Y-27632、法舒地尔在动物实验中研究表明,阻断RhoA/ROCK信号通路,可以减少神经元的凋亡,促进轴突生长,改善大鼠肢体运动功能。目前还没有关于亚低温与RhoA/ROCK信号通路关系的研究报告,本实验通过亚低温干预神经干细胞生长环境,通过检测RhoA/ROCK信号通路上相关基因、蛋白及离子浓度变化,初步推测亚低温与RhoA/ROCK信号通路关系,为治疗脊髓损伤提供更多切入点。方法:从Wistar胎鼠脑组织中提取神经干细胞,经过传代培养后,获得神经干细胞悬液。利用自行设计的液压冲击装置:用三通管将压力表、注射器、培养瓶三者连接起来,摆锤打击注射器一端,压力通过注射器内的液体传递到培养瓶中培养细胞层,造成细胞损伤,通过上述原理制备大鼠神经干细胞液压损伤模型。将制备的大鼠神经干细胞液压冲击伤模型随机分为亚低温组和常温组。常温组在37.0±0.5℃环境中放置4h,亚低温组在32.0±0.5℃环境中放置4h。RT-PCR法检测神经干细胞中RhoA、ROCK、Nogo-A、NgR mRNA相对表达水平。Bradford法检测RhoA、ROCK、Nogo-A、NgR蛋白含量。用Insight-PlusIQ型激光共聚焦显微镜488 nm氢激光激发而产生荧光,测定其荧光强度。根据公式[Ca²⁺]_i=Kd[(F-F_min)/(F_max-F)](Kd为400 nmol/L;F为测量的相对荧光值;F_max为加入10μmol/L高钙液后所得最大荧光值;F_min为加入10μmol/L无钙液后所得最小荧光值)计算钙离子浓度。免疫荧光检测RhoA/ROCK阳性细胞数。结果:（1）亚低温组神经干细胞RhoA、ROCK、Nogo-A、NgR mRNA表达较常温组明显降低（P<0.05）;（2）亚低温组RhoA、ROCK、Nogo-A、NgR蛋白含量较常温组降低（P<0.05）;（3）亚低温组神经干细胞内游离钙离子浓度低于常温组（P<0.05）;（4）亚低温组RhoA/ROCK阳性细胞数明显低于常温组（P<0.05）。结论:在亚低温条件下,神经干细胞RhoA/ROCK信号通路上的RhoA、ROCK、Nogo-A、NgR、钙离子浓度含量降低且RhoA/ROCK阳性细胞的数量减少,初步推测亚低温环境对神经干细胞RhoA/ROCK信号通路具有一定的抑制作用。