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对癌症的无创诊断一直是临床医学领域研究的热点。常规的诊断技术周期较长、费用昂贵,有的诊断方法如穿刺活检等往往会给患者带来极大的痛苦。通过检测肺癌患者体液中某些小分子代谢标记物的含量可以为肺癌的早期诊断提供一定的依据,是一种很有发展前景的无创诊断方法。但人体体液如血液和尿液中复杂的基质容易干扰实验测定,因此需选择合适的样品前处理方法对样品进行分离、富集和纯化,以提高检测的准确度和灵敏度。
磁性固相萃取法是近年来发展起来的一种新型的样品前处理技术。该技术采用磁性纳米粒子为吸附萃取剂,利用纳米粒子较大的比表面积或表面键和的特异性官能团对样品中目标物进行萃取,通过外加磁场实现目标物和样品溶液的分离。该方法实验萃取效率高、操作简便,无需样品离心的步骤,节省了实验用时,且有机溶剂的使用量少,减少了有机试剂环境污染及对实验操作人员的毒害。
凝固-漂浮有机液滴液相微萃取法(SFODLPME)是一种由传统的液相微萃取(LPME)发展而来的样品前处理方法,具有萃取效率高、操作简单、成本较低和环境友好等优点。传统的LPME法只能选择密度比水大且对被萃取物有良好亲和性的有机溶剂为萃取剂,而SFODLPME法选择密度比水小、凝固点与室温接近的有机溶剂如1-十二醇等为萃取剂,扩大了传统LPME对萃取剂的选择。
本课题采用了这两种新型的样品前处理技术并将其与高效液相色谱联用,对人体体液中的己醛和庚醛含量进行检测。
主要研究内容有:
1、采用磁性固相萃取和高效液相色谱联用的方法,对人体尿样中的己醛和庚醛的含量进行测定。首先让目标物进行衍生化反应,以2,4-二硝基苯肼为衍生化试剂,甲酸为反应催化剂,而后以amine-Fe3O4磁性纳米粒子为吸附剂,成功分离萃取了醛类物质的衍生化产物。优化了一系列衍生化反应及萃取的条件,并将其应用于人体尿样的分析检测。
2、采用磁性固相萃取和高效液相色谱联用的方法,对人体尿样中的己醛和庚醛的含量进行测定。以C8-amine-Fe3O4磁性纳米粒子为吸附剂,对吸附剂的用量、衍生化试剂的用量、催化剂的用量、衍生化反应时间及温度、盐效应等条件进行了优化,并将其应用于实际尿样的分析检测。
3、采用凝固-漂浮有机液滴液相微萃取和高效液相色谱联用的方法,对人体血样中己醛和庚醛的含量进行测定。实验选用1-十二醇为萃取剂,对衍生化产物腙进行萃取。萃取完成后,将样品溶液置于低温环境中,1-十二醇迅速凝固,复溶后取样进行色谱分析。优化了一系列衍生化反应条件及萃取条件,并将其应用于实际血样的测定中。