重组干扰素-α是一种具有抗病毒、抗繁殖和免疫调节等特性的药物蛋白,多次用于临床治疗疾病和癌症。然而,它在人体内半衰期非常短,使它不能大规模应用于临床。因此,本文通过聚乙二醇与蛋白质的化学耦合来延长干扰素-α的半衰期。利用基因定点突变在蛋白质非活性位点引进半胱氨酸残基,通过这个半胱氨酸残基将蛋白质和聚乙二醇(末端含有与半胱氨酸反应的活性基团)进行共价连接,这种方法的优点是能产生高生物活性,单一位点耦合物。由Bolder Biotechnology, nc生物技术公司构建的含有干扰素-α基因的质粒转化进大肠杆菌W3110,IPTG诱导后经SDS-PAGE分析,表达产物的分子量为19KD左右,并且蛋白以不溶性的包涵体形式存在。Western-blot印迹分析证实表达产物具有良好的免疫学活性。同时优化了蛋白表达条件,结果为:温度37℃,环境pH7.0,IPTG浓度0.5mM,诱导时间16小时。包涵体蛋白经过盐酸胍变性后稀释复性,然后利用阳离子交换色谱层析(IEC)分离得到目标蛋白,其纯度达到98%以上。同时,也对层析条件进行了优化,并最终从1L细菌培养基中得到22mg目的蛋白。最后干扰素-α与马来酰亚胺-PEG反应得到位点特异、单一的PEG化蛋白。