【摘 要】
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植物病毒病是仅次于真菌病害的第二大作物病害,因其危害严重、防治困难,素有“植物癌症”之称。其中烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）可侵染茄科、十字花科、菊科等36个科的400多种植物,严重危害作物生产。随着绿色防控理念和化肥农药的“两个零增长”目标的提出,生物农药的开发越来越受到关注。近年来,植物源抗病毒物质凭着结构新颖、活性良好的优点脱颖而出并成为抗病毒药剂筛选当中的
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植物病毒病是仅次于真菌病害的第二大作物病害,因其危害严重、防治困难,素有“植物癌症”之称。其中烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）可侵染茄科、十字花科、菊科等36个科的400多种植物,严重危害作物生产。随着绿色防控理念和化肥农药的“两个零增长”目标的提出,生物农药的开发越来越受到关注。近年来,植物源抗病毒物质凭着结构新颖、活性良好的优点脱颖而出并成为抗病毒药剂筛选当中的热点之一。棒节石斛（Dendrobium findlayanum）隶属兰科石斛属,药用历史悠久,前期研究表明,该属植物所含化学成分结构类型多样,具有多种药理活性,但在抗植物病毒方面未见报道。本研究以心叶烟（Nicotiana glutinosa L.）、三生烟（N.tabacum var.Samsun NN）和本生烟（N.benthamiana）为寄主材料,以TMV为供试毒源,对棒节石斛中次生代谢产物的活性成分进行了初步分离筛选,并对其抑制TMV活性的作用机制进行了研究。主要得出以下结果:（1）采用硅胶柱层析、凝胶柱层析和反相柱层析等分离手段对棒节石斛中石油醚和乙酸乙酯相粗提物进行分离纯化,共分离得到8种化合物,并鉴定了其化学结构,包含两种生物碱类化合物等,利用多种波谱技术并对比相关文献,鉴定其分别为2-羧基-4,6-二甲氧基-肉桂酸（1）,dendrofindline B（2）,findlayline A（3）,2,7-二羟基-4-甲氧基-9-芴酮（4）,the novel ester n-triacontyl coumarate（5）,β-胡萝卜甾醇（6）,β-胡萝卜苷（7）,β-sitostrerol（8）,其中findlayline A和dendrofindline B为生物碱化合物。（2）利用半叶枯斑法测定以上化合物抗TMV活性,发现findlayline A和dendrofindline B这两种单体化合物抗TMV活性最好,findlayline A抑制率为14.63%,dendrofindline B抑制率为38.59%。接近于1000倍8%宁南霉素水剂的抗病毒活性。（3）对棒节石斛次生代谢产物防治TMV机理的研究发现,findlayline A和dendrofindline B这两种生物碱能够保护TMV侵染的烟草原生质体细胞形态完整;经findlayline A和dendrofindline B处理后,烟草的苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）和超氧化物歧化酶（SOD）活性和清水对照组相比差异显著,POD和PAL与对照组相比明显升高,SOD与对照组相比相对降低,表明findlayline A和dendrofindline B可以协助细胞清除有害物质,从而降低SOD的活性;通过Western blot证明findlayline A和dendrofindline B能明显抑制TMV外壳蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测表明findlayline A和dendrofindline B与病毒结合后,会导致化合物处理组的叶片中TMV外壳蛋白基因的积累量低于对照组,利用分子对接模拟预测显示findlayline A和dendrofindline B小分子会通过极性等相互作用与病毒外壳蛋白的活性位点结合,从而抑制TMV外壳蛋白的活性。
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