硫酸吲哚酚的电化学检测方法学研究及临床应用

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:larrytangliang
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目的:1.建立一种简便、快速的血浆硫酸吲哚酚(Indoxyl sulfate,IS)的电化学检测方法。2.采用所建立的电化学方法测定妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus,GDM)患者和健康孕妇血浆中硫酸吲哚酚含量,并探究其在妊娠期生理和病理状态下的变化。3.建立一种同时检测硫酸吲哚酚和吲哚(Indole,IND)的电化学方法。方法:1.利用硫酸吲哚酚在一定电位条件下能被氧化的性质,分别采用循环伏安法(Cyclic voltammetry,CV)和示差脉冲伏安法(Differential pulse voltammetry,DPV)对硫酸吲哚酚进行定性和定量分析。血浆样本经蛋白质沉淀处理后,取上清液氮吹至干,再将样品复溶于缓冲溶液中,并将其滴加到丝网印刷碳电极(Screen printed carbon electrode,SPCE)表面,进行电化学检测。采用所建立的电化学方法和高效液相色谱-荧光检测法(High performance liquid chromatography-fluorescence detection,HPLC-FLD)同时测定血浆硫酸吲哚酚的浓度,并将两种方法测得的结果进行比较。2.采用所建立的电化学方法测定20例GDM患者和20例健康孕妇血浆中硫酸吲哚酚含量,收集其临床基本信息和相关实验室指标,并对其进行统计学分析。3.利用硫酸吲哚酚和吲哚在SPCE上显示出的不同电化学性质,采用DPV实现二者同时检测。结果:1.在最优实验条件下,建立的电化学法检测血浆硫酸吲哚酚的线性范围为1.0~160.0μmol/L,回归方程为:y=0.0369 x+0.3460(R~2=0.9942),检测限(Limit of detection,LOD)为0.2μmol/L(S/N=3)。日内和日间精密度的相对标准偏差分别低于5.1%和6.9%,回收率为96.1%~106.9%。在测定血浆硫酸吲哚酚时,所建立的方法与HPLC-FLD法具有良好相关性(r=0.8935,p=0.000)。2.GDM组孕妇血浆硫酸吲哚酚含量(13.70μmol/L)显著高于对照组(6.22μmol/L),具有统计学差异(p<0.05)。临床资料分析发现,GDM组的舒张压、餐后1 h血糖(1 hour postprandial blood glucose,1h PG)、餐后2 h血糖(2 hour postprandial blood glucose,2 h PG)和胰岛素与对照组相比,具有统计学差异(p<0.05)。相关性分析显示,硫酸吲哚酚浓度与1 h PG和2 h PG水平呈显著正相关(p<0.05),而与直接胆红素和乳酸脱氢酶水平呈显著负相关(p<0.05)。回归分析显示,硫酸吲哚酚是GDM患者的危险因素,优势比为1.554(p<0.05)。受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线分析显示,硫酸吲哚酚对GDM具有较好的诊断效能,曲线下面积(Area under the curve,AUC)为0.873,灵敏度为70.0%,特异度为100.0%。3.在最优实验条件下,电化学法同时检测硫酸吲哚酚和吲哚的线性范围分别为:2.0~47.9μmol/L和0.9~34.1μmol/L,回归方程分别为:y(IS)=0.0215 x+0.0044,R~2=0.9966,LOD为0.4μmol/L(S/N=3);y(IND)=0.0297 x+0.0156,R~2=0.9922,LOD为0.2μmol/L(S/N=3)。硫酸吲哚酚和吲哚日内精密度的相对标准偏差分别低于1.8%和4.5%,日间精密度的相对标准偏差分别低于4.0%和8.1%,回收率分别为97.7%~105.9%和96.4%~107.0%。结论:1.免修饰SPCE直接电化学法检测血浆中的硫酸吲哚酚具有简便、价廉、灵敏、高效的特点。由于SPCE可批量生产,易实现微型化检测,故该方法在实验室检测和临床研究方面具有潜在应用价值。2.硫酸吲哚酚是GDM患者的危险因素,对GDM具有较好的诊断效能,诊断特异度强,提示硫酸吲哚酚或可作为GDM诊断指标的新选择。GDM患者体内存在硫酸吲哚酚代谢紊乱,提示硫酸吲哚酚可能在GDM的发生、发展过程中发挥着重要作用。3.同时检测硫酸吲哚酚和吲哚的电化学方法具有重复性好、简便、快速的特点。该方法为构建灵敏特异的硫酸吲哚酚和吲哚电化学传感器,研究体内吲哚和硫酸吲哚酚的代谢提供了新思路。
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