【摘 要】
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背景:皮肤鳞状细胞癌是表皮或附属器角质形成细胞恶变所致疾病,多发于平均年龄60岁的老年人,皮肤鳞癌常于日晒部位多发,患者病损大多分布于颜面部、背部等部位。临床常以手术治疗为主,常规治疗方法还包括激光治疗、药物治疗、放化疗等。近年来,光动力疗法（Photodynamic therapy,PDT）成为治疗皮肤鳞癌的有效治疗技术,但其治疗方案及参数并无统一标准。在有关PDT疗效的研究显示,激光的照射能量
【基金项目】
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北京市自然科学基金面上项目（7202200）； 国家重点研发计划（2018YFB0407202）；
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背景:皮肤鳞状细胞癌是表皮或附属器角质形成细胞恶变所致疾病,多发于平均年龄60岁的老年人,皮肤鳞癌常于日晒部位多发,患者病损大多分布于颜面部、背部等部位。临床常以手术治疗为主,常规治疗方法还包括激光治疗、药物治疗、放化疗等。近年来,光动力疗法（Photodynamic therapy,PDT）成为治疗皮肤鳞癌的有效治疗技术,但其治疗方案及参数并无统一标准。在有关PDT疗效的研究显示,激光的照射能量、所用光敏剂的浓度以及相应的药物孵育时间对PDT的疗效都有一定的影响,且合适参数的PDT处理对鳞癌细胞具有杀伤作用。目的:探讨不同参数PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞杀伤效应及免疫效应的影响。方法:实验对象为人皮肤鳞癌细胞系（A431）,使用不同参数PDT对鳞癌A431细胞进行光动力处理,采用CCK-8法检测各组细胞的活力、酶标仪检测ROS表达、显微镜观察细胞形态并采集图片、流式细胞技术检测细胞的凋亡及与A431细胞共培养后,树突状细胞（Dendritic cells,DC）表面CD80、CD86、MHC-II的表达。结果:（1）单独激光照射及单独使用光敏剂对细胞生长无抑制效应,PDT对A431细胞的抑制效应受光敏剂浓度以及光照能量密度共同影响。在一定范围内,随光敏剂浓度、光照剂量的增加,PDT对细胞的抑制效应随之增加,但光动力疗法对细胞的抑制效应不随剂量增加而无限增加。（2）未经PDT处理的A431细胞,贴壁成片生长、排列有序紧密、形态规则均一;能量密度3J/cm2时,随着光敏剂浓度增加,细胞排列紊乱、细胞间隙逐渐增宽、皱缩破裂细胞比例逐渐增高。（3）能量密度3J/cm2时,随着光敏剂浓度的递增,ROS含量随之增加,且诱导A431细胞发生凋亡的比率也随之增加。（4）DC细胞表面CD80、CD86、MHC-II的表达与光敏剂浓度并非呈剂量依赖性增加。当光敏剂浓度在0-31.25μg/ml时,经PDT处理的A431细胞诱导DC成熟的能力随光敏剂浓度增加而增强;当光敏剂浓度超过31.25μg/ml时,经PDT处理的A431细胞诱导DC成熟的能力随光敏剂浓度增加而减弱。结论:（1）合适参数的光动力处理对A431细胞具有杀伤作用,光敏剂浓度62.5μg/ml、能量密度9J/cm2时,ALA-PDT对A431细胞的抑制效应达到最佳,继续增加光敏剂浓度或光照能量密度均不能提高PDT对A431细胞的抑制效应。（2）能量密度3J/cm2时,光敏剂浓度对PDT处理A431细胞所诱导的免疫效应与杀伤效应不同,其产生的免疫效应与光敏剂浓度并非剂量依赖性增加,光敏剂浓度31.25μg/ml诱导DC成熟的能力最强。
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