【摘 要】
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在养殖生产过程中,仔猪在断奶期由于各种因素应激,导致仔猪肠道形态和结构出现不同程度的破坏,导致食欲不振、腹泻、生长停滞等所谓的“断奶仔猪应激综合征”,严重影响仔猪的
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在养殖生产过程中,仔猪在断奶期由于各种因素应激,导致仔猪肠道形态和结构出现不同程度的破坏,导致食欲不振、腹泻、生长停滞等所谓的“断奶仔猪应激综合征”,严重影响仔猪的健康和养殖效益。GLP-2是一种特异性肠道营养因子,在特异性地促进肠上皮细胞的增殖、减轻肠细胞的凋亡和损伤、维持肠道黏膜的完整性方面发挥着重要的作用。但肠道内的二酰肽酶IV(Ddipeptidyl peptidase-IV,DPP-IV)对完整的GLP-2第二位的丙氨酸的酶切,致使GLP-2的半衰期很短。因此,本研究对猪源胰高血糖素样肽2(pGLP-2)基因进行氨基酸定点改造,将GLP-2的第二位的丙氨酸替换成甘氨酸,形成不被DPP-IV酶切的p(Gly2)-GLP-2,并进行植物乳杆菌(Lp1)的密码子偏嗜性修饰,克隆至由超强启动子SCP驱动外源基因表达的植物乳杆菌表达载体pSCPSP,成功构建了表达载体pSCPSP-p(Gly2)-GLP-2,将质粒电转化入植物乳杆菌LP1。通过基因组PCR方法鉴定后获得阳性重组转化子pSCPSP-p(Gly2)-GLP-2-LP1,将24 h培养上清进行Tricine-SDS-PAGE检测目的条带,可观察到4 KD左右目的条带。并用pGLP-2 ELISA特异性检测试剂盒检测24 h、36 h、48 h时间培养上清中目的蛋白的含量,结果显示随着时间增加,表达量呈下降趋势,最后确定最佳表达时间为24 h。为验证本试验表达的p(Gly2)-GLP-2的体内生物活性,建立由DSS诱导的小鼠慢性结肠炎模型后,进行对比治疗试验。表达的p(Gly2)-GLP-2在小鼠肠炎模型试验中表现出良好的生物活性。本试验成功构建的由超强启动子SCP组成的表达系统成功在植物乳酸杆菌中表达了改造后的p(Gly2)-GLP-2,在小鼠体内外具有良好的生物活性,为养殖生产中解决仔猪断奶应激综合症提供理论依据和技术手段。
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