猪附红细胞体生物学特性的研究及间接ELISA方法的建立

来源 :莱阳农学院 青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:alan39
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本试验探讨了影响猪附红细胞体的感染率的因素,并以RPMI-1640作为基础培养基,对分离的猪附红细胞体进行体外培养,并获得成功。将体外培养成功的附红细胞体,经过分离提纯,测得膜蛋白有4条主蛋白带,另外还有2条次等蛋白带。经过处理的猪附红细胞体作为包被抗原,对猪附红细胞体间接ELISA各项反应条件进行了摸索,确定了最适工作浓度。研究结果表明:猪附红细胞体在以RPMI-1640为基础培养液的完全培养基中生长良好;附红细胞体抗原最佳包被浓度为38.75ug/ml,血清最佳稀释度为1:80,血清反应时间为1小时,封闭液选择1%BSA封闭1小时,酶标二抗最佳稀释度为1:3200,底物反应时间确定为15min。阴阳性临界值为0.33。与HCV、PRRSV和大肠杆菌的标准阳性血清呈阴性反应,与猪附红细胞体标准阳性血清呈阳性反应,证明该方法具有良好特异性。ELISA方法与常规镜检方法相比较,其检出率是镜检的1.76倍,证明ELISA作为诊断猪附红细胞体的一种方法具有灵敏、快速的优点,适合大规模养殖场对附红细胞体病的调查,从整体水平上把握该病的流行情况,为控制该病的传播提供依据。
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