许氏平鮋细菌通透性增加蛋白的基因克隆及功能分析

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangdianxitong
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文以许氏平鮋Sebastes schlegelii为研究对象,研究了许氏平鮋细菌通透性增加蛋白(bactericidal permeability-increasing protein)BPI(SsBPI)基因结构、表达特征及生物学功能。合成SsBPI衍生肽BS1,并对其进行了杀菌活性和杀菌机制研究。  本研究主要内容包括:⑴从许氏平鮋中鉴定出SsBPI基因,通过PCR扩增成功克隆出SsBPI基因,并为SsBPI基因添加酶切位点,连接T载体,获得了稳定的基因克隆。⑵运用生物信息学软件分析了SsBPI全长cDNA序列,对SsBPI氨基酸序列进行分析并构建系统进化树。结果表明:SsBPI基因全长2170 bp,SsBPI开放阅读框为1422 bp。经序列比对和构建的系统进化树发现,SsBPI氨基酸序列与条石鲷Oplegnathus fasciatus的SsBPI的序列同源性最高,达到了84.78%。⑶正常生理状态下从许氏平鮋中取肝脏,脾脏,肾脏,肌肉,血液,脑,肠,鳃,心脏等九个组织,研究SsBPI在组织中的表达分布情况;利用鳗弧菌刺激许氏平鮋研究肾脏和脾脏中SsBPI的表达水平。结果表明:组织特异性分析发现,SsBPI在九种组织中均有表达,SsBPI在血液中的表达量最高。此外,SsBPI在肾脏和脾脏中的表达可受鳗弧菌的诱导,且表达水平与诱导时间相关。⑷构建了Rransetta/pGEX-BPI表达菌株,通过诱导得到了重组的SsBPI(rSsBPI)蛋白并进行了纯化。⑸发现SsBPI氨端肽具有广谱抗菌活性,命名为BS1。经实验检测,BS1可以有效杀死革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。利用透射电子显微镜技术,将BS1与靶细菌一起孵育2小时、4小时,发现BS1可以与副溶血弧菌细胞膜结合,改变细菌细胞膜结构和提高细胞膜通透性,最终杀死靶细菌。将BS1用FITC进行荧光标记,利用荧光显微镜技术,对BS1在细菌细胞中进行定位,研究发现BS1不进入细菌细胞内部。本实验首次研究报道了硬骨鱼BPI来源的多肽SsBPI,SsBPI具有广谱抗菌活性,并在宿主防御细菌感染过程中发挥着重要作用。
其他文献
中国是世界上拥有丰富海洋渔业资源的国家之一,其海域面积非常辽阔。海洋渔业资源能够提供大量富含蛋白质、营养价值高的海洋食品,为人类提供着重要的生态服务,然而随着人类对渔
睡美人转座子(Sleeping Beauty transposon,SB)系统是一种能有效提高基因整合效率的工具。本实验研究了不同SB转座子系统在鱼类细胞中的整合特性。实验中构建了携带外源报告
黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)是我国淡水养殖的优良品种,近些年由于大规模和高密度的养殖,其在养殖过程中极易受到细菌性疾病的危害,对黄颡鱼健康养殖造成了严重的影响。
本文采用富集文库-菌落原位杂交法构建了三疣梭子蟹微卫星富集文库,分离筛选出30对扩增条带清晰稳定,多态性较高的引物,选取其中8对引物对我国由南到北五个群体(舟山、海州湾
凡纳滨对虾在我国海水养殖中占有非常重要的地位,也是我国甲壳动物养殖业的最主要品种。近些年,其养殖的面积和产量稳步上升,带动了当地经济的发展,但也存在着不少问题,尤其