【摘 要】
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目的:检测NADPH、ROS及NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4在EAM小鼠骨骼肌组织中的表达,研究探讨NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4介导的ROS在IIM发病机制中的作用及意义。方法:将健康雌性BALB/c小鼠随机分为对照组和EAM组,EAM组小鼠采用豚鼠骨骼肌匀浆蛋白免疫诱导实验性自身免疫性肌炎动物模型。观察各组小鼠的临床表现并依据Lennon等临床表现评分方法进行临床评分;测量各组
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目的:检测NADPH、ROS及NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4在EAM小鼠骨骼肌组织中的表达,研究探讨NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4介导的ROS在IIM发病机制中的作用及意义。方法:将健康雌性BALB/c小鼠随机分为对照组和EAM组,EAM组小鼠采用豚鼠骨骼肌匀浆蛋白免疫诱导实验性自身免疫性肌炎动物模型。观察各组小鼠的临床表现并依据Lennon等临床表现评分方法进行临床评分;测量各组小鼠的体重值、血清肌酶水平及反映肌力的抓屏时间;采用HE染色法检测各组小鼠骨骼肌组织的病理改变并依据Kohyama等肌肉组织HE染色病理学分级标准进行病理学评分;采用免疫组织化学法检测各组小鼠骨骼肌组织中NOX2和NOX4的表达;采用分光光度法和酶联免疫吸附试验分别检测各组小鼠骨骼肌组织中NADPH和ROS的含量。结果:（1）HE染色结果显示:对照组小鼠骨骼肌纤维面积大小、结构形态基本正常,有少量炎性细胞浸润,未见肌纤维萎缩、变性、坏死,该组小鼠骨骼肌组织病理学评分为0.42±0.38分;EAM组小鼠骨骼肌纤维大小不一、粗细不等,有大量炎性细胞浸润,可见不同程度的萎缩、变性、坏死,该组小鼠骨骼肌组织病理学评分为2.92±0.74分,显著高于对照组（P<0.05）。（2）对照组小鼠骨骼肌组织中NADPH含量为33.32±3.93nmol/g,ROS含量为169.83±9.06U/ml;EAM组小鼠骨骼肌组织中NADPH含量为17.08±4.00nmol/g,ROS含量为275.33±10.23U/ml;与对照组小鼠相比,EAM组小鼠骨骼肌组织中NADPH的含量下降,ROS的含量升高（P<0.05）。（3）免疫组化染色结果显示:对照组小鼠骨骼肌组织中NOX2及NOX4的阳性表达率均为16.7%,NOX2的免疫组化评分为2.30±0.68分,NOX4的免疫组化评分为2.47±0.52分;EAM组小鼠骨骼肌组织中NOX2及NOX4的阳性表达率均为100.0%,NOX2的免疫组化评分为5.57±0.75分,NOX4的免疫组化评分为5.87±0.62分;NOX2和NOX4在EAM组小鼠骨骼肌组织中的表达均高于对照组小鼠（P<0.05）。（4）Pearson相关分析结果提示:EAM组小鼠骨骼肌组织中ROS的含量与NOX2、NOX4的免疫组化评分均成正相关,而与NADPH的含量成负相关,相关系数分别为r=0.968,P=0.002;r=0.911,P=0.012;r=-0.878,P=0.021。EAM组小鼠骨骼肌组织HE染色病理学评分与NOX2、NOX4的免疫组化评分及ROS的含量均成正相关,而与NADPH的含量成负相关,相关系数分别为r=0.933,P=0.007;r=0.942,P=0.005;r=0.934,P=0.006;r=-0.920,P=0.009。结论:（1）NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4介导的ROS可能通过铁死亡途径参与了IIM的发病过程,提示在IIM的发病机制中NOX2和NOX4介导的ROS起着至关重要的作用。（2）NOX2和NOX4可能通过消耗NADPH产生大量的ROS,导致组织细胞的氧化性损伤并诱导铁死亡反应来参与IIM的发病。（3）NADPH、NOX2、NOX4和ROS有望成为新的评价IIM肌肉组织损伤程度的指标。
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