低氮或高碳促进红发夫酵母合成虾青素的初步研究

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本文通过改变培养基的初始氮(硫酸氨)和碳(葡萄糖)浓度,发现低氮或高碳能够促进红发夫酵母合成虾青素。保持培养基中葡萄糖浓度恒定(20 g/L),当硫酸氨浓度为1 g/L时,红发夫酵母的生物量下降,但最大虾青素含量比硫酸氨浓度为5g/L和20 g/L时分别增加11%和30%,达到0.52 mg·g-1DCW;保持硫酸氨浓度恒定(5 g/L),当葡萄糖浓度为40 g/L时,红发夫酵母的最大虾青素含量比葡萄糖浓度为5 g/L和20 g/L时分别增加9%和24%,达到0.51 mg·g-1DCW。 运用代谢通量分析的方法,定量分析不同氮、碳浓度下红发夫酵母的中心碳代谢发现:(1)红发酵母的磷酸戊糖途径的通量都相当的高,这与红发夫酵母的生理特点相吻合。红发发酵母是一种富含脂质的酵母,磷酸戊糖途径是其细胞质中NADPH的主要来源。磷酸戊糖途径的高通量,就为其脂肪酸和虾青素的合成提供了充足的还原力。(2)生成乙酰辅酶A的总反应的通量与合成虾青素反应的通量正相关,并且这两个通量都随培养基中初始氮浓度的降低而升高,随初始葡萄糖浓度的增加而增加,这说明乙酰辅酶A是红发夫酵母合成虾青素的一个限制因素。 通过测定红发夫酵母丙酮酸代谢相关酶的活性,发现红发夫酵母的丙酮酸代谢有多条去路,但参与丙酮酸脱氢酶旁路的两种酶--乙醛脱氢酶和乙酰辅酶A合成酶在红发夫酵母中的活性极低。然而,柠檬酸裂解酶的活性较高,并且与红发夫酵母虾青素的合成明显呈正相关。酶活分析结果说明,柠檬酸裂解酶催化的裂解反应是红发夫酵母乙酰辅酶A的重要来源。柠檬酸裂解反应决定着红发夫酵母细胞质中乙酰辅酶 A 的供给,从而显著影响着其虾青素的合成。低氮或高碳培养条件能够提高柠檬酸裂解酶的活性,增加乙酰辅酶A的供给,从而促进红发夫酵母合成虾青素。
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