EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是一种存在感染性的人类疱疹病毒。大多数成年人首次感染EBV时无明显症状出现,仅少数感染者会发展成为感染性单核细胞增多症。人一旦感染EB病毒,EBV基因在体内将处于潜伏感染状态,只有一小部分病毒基因表达。当病毒再次被激活时,感染者将可能出现相应的临床症状。EBV是感染性单核细胞增多症（Infection Mononucleosis,IM）的主要病原体,并且与多种恶性肿瘤的发生、发展相关,例如鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinoma,NPC）、霍奇金淋巴瘤（Hodgkin’s lymphoma,HL）、伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma,BL）和胃癌（Gastric cancer,GC）等。目前对于EBV感染患者的治疗主要是抗病毒对症支持治疗,但其治疗效果不佳,因此接种EBV相关疫苗或中和抗体治疗成为了预防EBV感染或治疗与EBV相关疾病的重要方法。在本研究中,通过对国内外文献调研以及对EBV gp350基因全长序列分析,确定出EBV gp350基因的主要中和表位,选取EBV gp350 N端15-320个氨基酸重组表达,制备单克隆抗体。从病毒感染的B95-8细胞中提取EBV基因组DNA,以此基因组DNA为模板进行PCR扩增,获取目的基因gp35015-320aa;再将目的片段gp35015-320aa与表达载体p ET-32a连接构建重组表达载体,选用Rosettagami B（DE3）表达菌株表达重组蛋白,经包涵体洗涤、Ni-TED亲和层析等方法纯化gp35015-320aa蛋白,通过SDS-PAGE、免疫印迹法（Western blot,WB）、间接ELISA法等方法对重组蛋白进行鉴定分析,结果显示重组蛋白gp35015-320aa具有良好的反应原性,可用于后续相关实验。纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀,使用皮下多点注射方法,对6～8周龄Balb/c雄性小鼠免疫,4次免疫后,测得小鼠血清的抗体滴度可达到40万倍,说明表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。将小鼠脾脏细胞与SP2/6骨髓瘤细胞融合后,筛选出呈阳性的融合细胞,经4次亚克隆后,得到分泌抗体的杂交瘤细胞株。采用常规ELISA、WB及细胞免疫荧光等方法对小鼠单抗进行鉴定,结果表明筛选出的单克隆抗体具有良好的免疫反应性与特异性。综上所述,本研究成功重组表达了EBV包膜蛋白gp35015-320aa并制备了相应的单克隆抗体对其单克隆抗体性质分析,结果表明,在小鼠体内可诱导出针对gp35015-320aa蛋白的抗体应答,成功地筛选出数株免疫反应性与特异性良好的单克隆抗体,用抗体捕获病毒实验和中和实验等方法对抗体进行鉴定,发现其具有较好的病毒结合能力和中和能力。对抗gp35015-320aa单克隆抗体VH和VL基因序列进行了分析。所有这些结果的获得,为嵌合抗体的构建、表达奠定了基础,也为后续以gp350蛋白为基础的疫苗研发奠定了实验基础。