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猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)可引发猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),引起养猪业巨大的经济损失,是影响严重的病毒性传染病之一。PRRSV的临床特征为怀孕母猪繁殖障碍和仔猪呼吸紊乱,其感染的常见症状是长程病毒血症,缺乏天然免疫的诱导以及中和抗体产生延迟,这是控制PRRSV的主要障碍。1987年该病于北美首次发现,之后在世界范围内迅速传播。1995年,我国暴发PRRS疫情,2006年我国南方猪场暴发高致死性猪传染病,临床特征为高热、腹泻和发绀,严重的导致死亡,后经研究证实病原为高致病性PRRSV(Highly-pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)。TRIM5α是一种限制性因子,能在病毒粒子核心进入细胞质后迅速阻断逆转录病毒感染。TRIM5α发挥限制活性是通过识别包裹病毒基因组RNA的衣壳蛋白,从而靶向病毒核心。TRIM5α由4个结构域组成:RING、B-box、Coiled-coil和PRYSPRY结构域。作为E3泛素连接酶,TRIM5α能够与异二聚体E2以及UBC13/UEV1A相互作用,从而激活TAK1激酶、NF-κB和AP-1信号传导。但关于猪的TRIM5α(sTRIM5α)是否抑制PRRSV的复制,以及PRRSV是否拮抗TRIM5α的抑制作用,国内外还未有报道。因此本实验主要针对上述问题开展。首先通过过表达分析发现多种抗病毒分子能够抑制PRRSV的复制,其中TRIM5α的作用很显著,呈剂量依赖性;然后通过对比S-TRIM5α与人源TRIM5α,猴源TRIM5α的氨基酸序列,发现在几种哺乳动物中,TRIM5α的变异还是比较大的,所以后续的试验中选取了sTRIM5α作为研究对象;通过转染、双荧光素酶等检测方法,发现sTRIM5α能激活AP-1天然免疫信号通路并呈剂量依赖性,而且激活AP-1信号通路的关键位点是RING结构域第15和18位的半胱氨酸;最后通过转染、co-IP等方法,发现S-TRIM5和TAK1之间能够相互作用,且S-TRIM5能使TAK1泛素化。其次,通过转染、双荧光素酶检测等,发现PRRSV的非结构蛋白能拮抗sTRIM5α信号通路,其中非结构蛋白(Non-structure protein,Nsp)Nsp1α和Nsp1β的拮抗作用最显著;然后通过转染、Westernblot等方法,发现Nsp1α和Nsp1β均能抑制sTRIM5α、TRAF6、TAK1和TAB2的表达;最后通过转染、Western-blot和点突变等方法,发现Nsp1α抑制TAK1的关键位点在ZF1区。因此我们得出如下结论:sTRIM5α能抑制PRRSV的复制,并能激活AP-1天然免疫信号通路;PRRSV的非结构蛋白Nsp1α和Nsp1β能拮抗sTRIM5α对AP-1信号通路的激活;Nsp1α和Nsp1β拮抗4种天然免疫信号分子的表达;Nsp1α对TAK1的抑制与ZF1区的C8S/C28S、C10S/C25S有关。