B族维生素免疫分析方法的建立

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维生素对人体有着非常重要的意义,维持体内多种生化反应的正常进行。由于多数维生素无法由机体自身合成,需定时从膳食中摄取,当发生病变或饮食不均衡时,很容易导致维生素缺乏,导致更多疾病的发生;同时,过量补充维生素也会对人体造成伤害。随着人们生活质量的提高,市面上的维生素强化食品和保健品越来越多,品种繁杂,相关的质量监管也越来越重要。  维生素现有的检测方法主要集中在传统的微生物法和高效液相色谱法等仪器分析方法。微生物法耗时长,操作繁琐;高效液相色谱法不适合于高通量筛选和现场检测。因此,免疫分析法以其快速、灵敏、专一等特点,成为维生素检测方法的极大补充。  本实验建立了针对维生素B2、维生素B7和维生素B12的免疫分析方法。  通过CDI法合成了维生素B2的免疫原并得到了多克隆抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)的检测灵敏度达到6.73 ng/mL,线性范围为1-80 ng/mL,方法与高效液相色谱法和紫外分光光度法一致性良好。  通过氨基化的异硫氰酸荧光素与维生素B7成功合成了荧光示踪物,并建立起了针对维生素B7的荧光偏振免疫分析法(FPIA)。考察了不同荧光示踪物对检测的影响,得到了最佳检测条件下,灵敏度为450.30 ng/mL,线性范围为50-10000 ng/mL。  通过酸水解加CDI法,合成了维生素B12免疫原并得到了多克隆抗体,在ELISA的基础上建立了化学发光酶免疫分析法(CLEIA),检测灵敏度提高到0.92μg/mL,优于同条件下的ELISA法。  本实验为B族维生素提供了新的快速、灵敏、专一、高效的检测方法,尤其适用于现场检测与多样本检测,是高效液相色谱法等仪器检测方法极大的补充。
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