本文建立了以成熟胚为外植体的大葱高效离体再生体系,并对其再生过程中内源激素含量的变化进行了分析,以期探讨内源激素的作用机制,并对大葱组织培养中外源激素的合理添加提供理论依据。主要结果如下:试验通过对大葱不同器官:幼叶、根、花蕾和成熟胚进行愈伤组织诱导,结果表明成熟胚为最佳外植体,诱导率高且稳定;花蕾次之,关键是掌握幼蕾的时期;幼叶和根较难诱导愈伤组织产生。大葱成熟胚在添加2,4-D1.0-2.0 mg.l-1+6-BA2.0-4.0 mg.l-1的培养基上都可产生质量较好的愈伤组织,其中最佳诱导愈伤组织的激素组合为2,4-D1.0mg.l-1+6-BA2.0mg.l-1。愈伤组织继代培养初期以2,4-D1.0 mg.l-1+6-BA2.0mg.l-1为好,2,4-D浓度过低或者代之以NAA都会导致愈伤组织过早的进入分化阶段,不利于增殖。继代培养后期应适时降低2,4-D浓度,以使愈伤组织能保持较好的分化性能。大葱愈伤组织分化的激素组合以NAA0.5 mg.l-1+6-BA1.0 mg.l-1为最好,分化率达81.67%。6-BA浓度升高虽然可以提高分化率,达83.33%,但是极易导致严重的玻璃化。大葱愈伤组织分化产生不定芽后应及时转移到MS0培养基上,以逐步消除玻璃化现象,保证不定芽的正常生长。驯化移栽大葱再生苗的最佳基质为未灭菌的蛭石与草碳的混和基质(蛭石:草碳=1:1),可能是其透气性和保水性比较适合大葱再生苗的生长。大葱成熟胚诱导30d的愈伤组织分别在2,4-D 1.0mg.l-1+6-BA2.0mg.l-1和2,4-D0.5mg.l-1+6-BA2.0mg.l-1各继代30d,然后转移到NAA0.25 mg.l-1+6-BA1.0 mg.l-1培养基上或仅降低2,4-D浓度,可诱导胚状体的产生,前者的发生率明显高于后者,说明2,4-D对于大葱胚状体的产生有抑制效应,而NAA则可能有促进作用。大葱的花蕾和愈伤组织都对抗生素Kan有很高的抗性,在Kan浓度高达200.0 mg.l-1时也有一定的存活率,愈伤组织甚至还能以36.35%的增长率缓慢生长,这与许多其它单子叶植物类似;相对而言,大葱对抗生素G418则较为敏感,在G418浓度≥30.0 mg.l-1时就可被完全致死。因此,在以nptⅡ作选择标记基因的大葱转基因工作中,G418较适合作筛选剂。 <WP=7>大葱成熟胚再生过程中内源激素含量的变化试验表明,生长素对大葱的离体再生表现为阶段效应,在愈伤组织诱导的启动阶段含量很高,有积极作用;在不定芽分化的启动阶段含量降低,有负作用。脱落酸在愈伤组织诱导初期含量明显下降,中后期含量也很低,可能有负调控作用。赤霉素在分化过程的含量明显高于继代培养过程,可能对大葱愈伤组织的分化有促进作用。细胞分裂素在不定芽分化后期,即玻璃化发生期,含量急剧上升;在玻璃化芽转变为正常芽的过程中显著下降,因此推测可能是导致大葱不定芽玻璃化的主要因素。