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研究背景：口腔癌（oralcancer）是发生于口腔的恶性肿瘤之总称，每年新发病例超过30万[1]。目前，口腔癌主要采用化疗、放疗、手术等综合治疗手段进行治疗，但经过手术，放疗和化学治疗后，低于50%的患者能长期生存下来，且复发率很高，高达70%[2-4]；此外，还存在毒性较大、脏器功能丧失和易产生耐药性等其他缺陷。植物乳酸杆菌被公认为益生菌之一，能够调节胃肠道微生态菌群平衡、改善肝功能，增强机体的抗肿瘤免疫效应[5]。目前乳酸杆菌及其代谢产物抗肿瘤的作用已经引起了国内外广泛关注。本实验将植物乳杆菌代谢产物在体外直接作用于口腔癌细胞，评价其对口腔癌细胞生长和凋亡的影响，为益生菌的代谢产物在治疗口腔癌方面提供理论和实验基础。实验目的：1考察植物乳杆菌代谢产物对人舌鳞癌细胞系CAL-27细胞增殖的抑制作用和诱导细胞凋亡的作用。2探讨植物乳酸杆菌发酵乳清蛋白获得的代谢产物以及Ca2+对人舌鳞癌CAL-27细胞生长抑制作用和诱导细胞凋亡作用。实验方法：1植物乳杆菌23201分别经复原乳清培养基和复原乳清菊糖培养基培养，制备相应的代谢产物1（LPM1）和代谢产物2（LPM2）；采用MTT法检测LPM1和LPM2对CAL-27细胞增殖的抑制作用；通过吖啶橙染色法，在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态学变化；采用琼脂糖凝胶电泳法对LPM1和LPM2作用CAL-27细胞后的DNA片段的分析。2植物乳杆菌23201经复原乳清菊糖培养基培养，制备相应的代谢产物1（LPM1）。利用草酸钠溶液沉淀LPM1中的Ca2+获得不含Ca2+的代谢产物（LPM1-F）；采用MTT法检测不同浓度的LPM1和LPM1-F对CAL-27细胞体外增殖的抑制作用；通过吖啶橙染色法观察凋亡细胞的形态学变化；采用Annexinv-FITC/PI双染试剂盒检测早期凋亡率。结果：1不同浓度LPM1和LPM2分别作用CAL-27细胞24h，最大抑制率分别达到（44.2±3.3）%和（41±4.1）%；荧光显微镜下观察，凋亡细胞的细胞核不规则，凝聚呈新月形或马蹄形；琼脂糖凝胶电泳显示出典型的DNAladder。2不同浓度LPM1和LPM1-F分别作用CAL-27细胞24h，最大抑制率分别达到（48.81±4.96）%和（56.70±2.33）%；荧光显微镜下观察，凋亡细胞皱缩，凝聚呈新月形或马蹄形，贴壁不良；流式细胞仪结果显示：经LPM1和LPM1-F处理的CAL-27细胞早期凋亡率均高于对照组。结论：1植物乳杆菌代谢产物可以抑制CAL-27细胞的增殖，呈剂量依赖性关系，并以诱导CAL-27细胞凋亡方式为主，植物乳杆菌代谢产物中的主要生物活性成分及其作用机制正在进行进一步的研究。2植物乳酸杆菌代谢产物体外抑制CAL-27细胞生长，呈剂量的依赖性，并且诱导细胞凋亡，其中Ca2+对人舌鳞癌CAL-27细胞生长和凋亡无影响。