研究背景淋巴管是血液循环的重要辅助管道,多与动静脉相伴而行,血管渗出的蛋白、淋巴细胞以及组织间质细胞产生的大分子物质等主要经过淋巴管重吸收,淋巴管在维持机体体液平衡及免疫功能中发挥重要作用。胚胎时期,淋巴管主要是由胎儿主静脉分化、发育而来的。而成人的淋巴管再生发生于组织再生、炎症反应、创伤愈合等多种生理以及病理情况下。研究证实,淋巴管新生主要有两种方式：原有淋巴管以出芽方式新生；外周血内皮祖细胞(EPCs)迁移到局部组织转分化为淋巴管内皮细胞。迄今为止,探索淋巴管内皮细胞的生长与分化因素及其机制仍然是淋巴研究领域的重要课题。有研究证实,淋巴管新生与核因子-κB (nuclear factor-kappaB, NF-κB)通路的激活有十分密切的联系。在成体炎性环境下,某些炎性介质如LPS、IL-1β、IL-3和TNF-α等可以通过NF-κB通路诱导内皮细胞表达淋巴管内皮标志物Prox-1和VEGFR3等,诱导内皮细胞向淋巴管内皮分化。基质细胞衍生因子-1α(Stromal cell derived factor-1, SDF-1α)是炎性环境中常见的细胞因子,并能够激活NF-κB通路。体外实验证实,SDF-1α能够促进淋巴管内皮细胞的迁移、成管。而SDF-1α能否诱导内皮细胞分化为淋巴管内皮细胞,以及其在淋巴管新生中的作用鲜有报道。研究发现,SDF-1α/CXCR4轴在胎儿发育过程中,对血管系统的形成发挥了重要的作用,而在成人,SDF-1α/CXCR4轴可能参与了胃溃疡修复期血管的形成。在SDF-1α的刺激诱导下,人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)和鼠脑毛细血管上皮细胞株(IBE)均能形成内皮管型。以上研究证实,SDF-1α对胚胎及成人的血管新生都发挥了十分重要的作用。血管内皮与淋巴管内皮结构上有许多相似之处,然而关于SDF-1α是否能够促进淋巴管新生却鲜有报道。实验目的用不同浓度SDF-1α分别刺激脐静脉内皮细胞,在蛋白和基因水平检测相关标志物的表达,探讨SDF-1α对于诱导淋巴管内皮表型的作用,从而为进一步研究淋巴管形成机制及其相关疾病的治疗提供依据。材料和方法用含10%FBS的DMEM高糖培养基培养血管内皮细胞株CRL-1730,当细胞长至60%—70%,处于对数生长期时进行实验。用不同浓度的SDF-1α分别处理内皮细胞株CRL-1730,用实时荧光定量-PCR、Western blotting及免疫细胞化学等方法检测其血管内皮及淋巴管内皮细胞标志物的表达情况。用统计学分析软件SPSS17.0对结果进行统计学分析。结果SDF-la诱导培养之后,CRL-1730细胞株的内皮细胞标志物vWF、 VE-cadherin、VEGFR2随其浓度增高而表达降低,淋巴管标志物podoplanin、 Prox-1和LYVE-1随其浓度增高而表达增高。SDF-1α能够诱导血管内皮细胞表达淋巴管内皮细胞标志物。意义本文首次研究了SDF-1α在内皮细胞向淋巴管内皮细胞转分化中的作用。本实验证实SDF-1α能够下调CRL-1730细胞株内皮细胞标志物vWF、 VE-cadherin和VEGFR2的表达,同时诱导淋巴管标志物podoplanin、Prox-1和LYVE-1的表达。