研究目的乙醇是最常见的肝脏毒物之一,过度饮酒导致的肝损伤是一个世界性的医学难题。在西方国家,酒精性肝病(ALD)及其并发症是导致死亡的重要原因之一我国ALD发病也呈逐年攀升趋势,乙醇已经成为肝炎病毒后导致肝脏损伤的第二大病因。虽然近年来关于ALD发病的分子机制研究取得重大的突破,但对其防治措施并未有所进展。目前临床上用于ALD治疗的药物都存在着或多或少的问题,因而研发安全有效的预防ALD的药物具有重要的意义。大蒜油是从大蒜中提取的由30多种挥发性有机硫化物组成的混合物。药理学研究证实,大蒜油具有显著的抗氧化活性以及对某些代谢酶(如细胞色素P4502E1)的调节作用。因为氧化应激和CYP2E1的激活是ALD发病的重要病因,因而大蒜油可能具有潜在的防治ALD的功效。本研究采用一次经口给予雄性昆明小鼠4.8 g/kg bw乙醇建立急性酒精性肝损伤模型,通过测定血清和肝脏生化指标以及肝脏病理改变,评价大蒜油拮抗急性酒精性肝损伤的效果；并从机体抗氧化系统、线粒体功能、肝脏乙醇代谢酶系以及脂肪代谢等方面探讨大蒜油拮抗急性酒精性肝损伤的机理。最后,采用人正常肝细胞(L02)建立体外损伤模型,观察大蒜油对乙醇损伤L02细胞的保护作用。研究方法1.健康雄性昆明小鼠随机分为3个大组,分别给予30d、7d和1次大蒜油(50、100、200 mg/kg bw)或等体积玉米油处理后,一次性经口给予4.8 g/kg bw乙醇(50%,v/v,12 ml/kg bw)诱导急性酒精性肝损伤,测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性、肝体比值和肝脏甘油三酯(TG)含量以及病理学改变,评价大蒜油拮抗急性酒精性肝损伤的效果。2.称取适量肝组织,制备10%肝组织匀浆,利用试剂盒测定肝匀浆中丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽还原酶(GR)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)的活性,反映机体抗氧化系统的改变。3.差速离心法制备线粒体,测定线粒体膜电位和肿胀度来反映线粒体的功能；测定线粒体悬液中MDA和GSH含量,以及Mn-SOD和GPx的活性,来反映线粒体抗氧化体系功能。4.制备10%肝组织匀浆,测定乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)的活性,评价大蒜油对ADH和ALDH活性的影响。5.超速离心法制备微粒体,测定细胞色素P4502E1、1A2、3A的活性和蛋白表达；RT-PCR法测定CYP2E1的mRNA水平。6.测定胞浆中乳酸／丙酮酸的比值,反映NAD+/NADH的比值；ELISA法测定血清中极低密度脂蛋白(VLDL)水平,反映脂肪外输；测定血清游离脂肪酸(FFA)含量,反映外周脂肪动员;测定肝脏中磷酸化的AMP依赖的蛋白激酶(p-AMK)、磷酸化的乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、过氧化物酶体增殖物激活受-a(PPAR-a)、甾醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)以及脂肪酸合成酶(FAS)的蛋白水平和肝脏中FFA以及血清中脂联素和肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的含量的动态变化,探讨大蒜油拮抗急性酒精性脂肪肝的分子机制。7.培养人正常肝细胞(L02),建立酒精损伤细胞模型,测定细胞培养液中ALT和AST的活性,细胞中MDA、GSH和TG含量,以及细胞中CYP2E1和Caspase-3的蛋白表达,评价大蒜油拮抗乙醇所致的L02细胞损伤的效果。研究结果1.大蒜油拮抗急性酒精性肝损伤的效果评价1.1提前给予30 d大蒜油有效的拮抗了急性酒精性肝损伤与对照组相比,模型组血清ALT和AST的活性分别增加了14.47%(P<0.05)和38.37%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组血清ALT的活性分别下降了3.57%、8.93%和17.86%(P<0.05),AST的活性分别下降了12.39%、18.21%和24.36%(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,模型组肝脏TG的含量增加了177.99%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组肝脏TG的含量分别下降了39.39%、53.66%和54.33%(P<0.01)。肝脏冰冻切片苏丹Ⅲ染色结果显示,对照组未见脂滴,模型组有大量的橙黄色脂滴蓄积,三个剂量大蒜油组脂滴明显减少变小。1.2提前给予7d大蒜油有效的拮抗了急性酒精性肝损伤与对照组相比,模型组血清ALT和AST的活性分别增加了48.76%和71.64%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组血清中ALT的活性分别下降了27.50%、38.21%和39.29%(P<0.01)；AST的活性分别下降了29.96%、40.01%和43.62%(P<0.01)。与对照组相比,模型组肝脏TG的含量增加了120.99%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组肝脏TG含量分别降低了24.9%、33.7%%和47.5%(P<0.01)。病理学检查可见,大蒜油各组肝脏切片橙黄色脂滴明显减少变小。1.3提前2h给予1次大蒜油有效的拮抗了急性酒精性肝损伤与对照组相比,模型组血清ALT和AST的活性分别增加了55.89%和75.05%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组血清ALT活性分别下降了26.8%、36.5%和37.1%(P<0.05或<0.01)：AST活性分别下降了31.8%、40.0%和40.3%(P<0.01)。与对照组相比,模型组肝脏TG的含量增加了130.01%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组肝脏TG的水平分别下降了18.50%、28.21%和47.47%(P<0.01)。病理学检查显示,大蒜油组肝脏切片橙黄色脂滴明显减少变小。1.4不同时间给予大蒜油拮抗急性酒精性肝损伤的效果比较与对照组相比,模型组血清ALT和AST的活性分别增加了52.35%和53.45%(P<0.01)。与模型组相比,提前2h给予大蒜油组、与乙醇同时给予大蒜油组以及乙醇暴露2h后再给予大蒜油组血清ALT的活性分别下降了33.33%、26.67%和26.15%(P<0.01)；AST的活性分别下降了30.66%、23.68%和18.20%(P<0.01)；各大蒜油给予组之间相比无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,模型组肝脏TG的含量增加了142.51%(P<0.01)。与模型组相比,提前2h给予大蒜油组、与乙醇同时给予大蒜油组以及乙醇暴露2h后再给予大蒜油组小鼠肝脏TG的含量分别下降了38.17%、30.56%和21.03%(P<0.05或<0.01)。病理学检查显示,大蒜油提前给予组和与乙醇同时给予组小鼠肝脏脂肪变性明显减轻；大蒜油延后给予组脂滴较模型组略有减少。2.大蒜油对小鼠肝脏抗氧化系统的影响2.1提前给予30d大蒜油提高了机体的抗氧化能力与对照组相比,乙醇暴露16h后模型组肝匀浆MDA的含量增加了94.83%(P<0.01),GSH含量下降了18.41%(P<0.05)。提前给予30 d大蒜油有效的抑制了肝脏中MDA含量增加和GSH含量下降,中高剂量大蒜油组MDA含量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝匀浆SOD的活性降低了13.94%(P<0.05),GR的活性降低了22.36%(P<0.05)。提前给予30 d大蒜油组小鼠肝脏SOP、GR以及CAT的活性有不同程度的升高。与模型组相比,高剂量大蒜油组小鼠肝匀浆SOD、GR、CAT的活性分别升高了27.51%、33.57%和18.58%(P<0.05或P<0.01)。2.2提前给予7d大蒜油提高了机体的抗氧化能力与对照组相比,模型组小鼠肝匀浆中MDA含量增加了66.36%(P<0.01),GSH含量下降了10.66%(P<0.05)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组肝匀浆中MDA水平分别降低了13.82%、20.32%和28.35%(P<0.01或<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝匀浆中GR和CAT的活性分别下降了24.09%(P<0.01)和23.90%(P<0.05)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝匀浆GR的活性分别升高了42.23%、41.24%和59.58%(P<0.01)；大蒜油中高剂量组小鼠SOD活性分别升高了8.58%和13.10%(P<0.05或<0.01)；大蒜油中高剂量组小鼠肝脏CAT的活性分别升高了14.73%(P>0.05)和45.09%(P<0.01)。2.3提前2h给予1次大蒜油提高了机体的抗氧化能力与对照组相比,模型组小鼠肝匀浆MDA含量增加了82.58%(P<0.01),GSH含量下降了10.40%(P<0.05)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝匀浆MDA含量分别降低了14.18%、29.80%和32.75%(P<0.05或P<0.01)；中高剂量大蒜油组小鼠肝匀浆GSH含量分别升高了6.63%和9.01%(P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝匀浆GR的活性降低了28.32%(P<0.01)。与模型组相比,中高剂量大蒜油组小鼠肝匀浆SOD活性分别增加了14.48%和17.00%(P<0.01),GST活性分别升高了19.92%和42.13%(P<0.05或<0.01)；低中高剂量大蒜油组GR活性分别升高了28.56%、37.93%和50.45%(P<0.05或<0.01)。2.4提前2h给予1次大蒜油对线粒体功能和线粒体抗氧化系统的影响与对照组相比,模型组小鼠肝细胞线粒体A540nm降幅在8、16 h时间点分别增加了45.70%和42.47%(P<0.01)；提前给予大蒜油各组小鼠5 min内A540nm降幅较模型组均显著降低(P<0.01)。在乙醇暴露后4h时间点,各组小鼠肝细胞线粒体加入前后荧光强度的降幅之间未见统计学差异,表明线粒体的跨膜电位未受影响。在8、16 h两个时间点,与对照组相比,加入模型组小鼠肝细胞线粒体前后荧光强度降幅分别减少了8.76%(P<0.05)和8.96%(P<0.01)。在16h时间点,与模型组相比,加入中高剂量大蒜油组小鼠肝细胞线粒体前后荧光强度的降幅分别增加5.05%和5.89%(P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝细胞线粒体MDA含量在4、8、16 h分别增加73.94%、311.02%、279.86%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝细胞线粒体MDA含量在8 h时间点分别降低了47.06%、49.80%和55.70%(P<0.01),在16h时间点分别降低了42.60%、61.10%和60.59%(P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠肝细胞线粒体GSH含量在4、8 h未见显著差异,在16 h降低了24.20%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝细胞线粒体GSH含量在8h时间点分别增加32.92%、41.45%和41.17%(P<0.01)；高剂量大蒜油组肝细胞线粒体GSH含量在16h时间点增加37.6%(P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠肝细胞线粒体SOD的活性在4h时间点升高了46.39%(P<0.01),在8h时间点降低了27.09%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝细胞线粒体SOD的活性在8h时间点呈现剂量-依赖性升高(P<0.05或P<0.01)。在各个时间点,各组别小鼠肝脏细胞线粒体GPx的活性均未见显著差异(P>0.05)。3.大蒜油对小鼠肝脏乙醇代谢酶系的影响3.1大蒜油对小鼠肝脏ADH和ALDH活性的影响大蒜油对小鼠肝细胞胞浆中ADH和ALDH的活性无显著影响(P>0.05)。3.2大蒜油对小鼠肝脏CYP2E1活性、蛋白和mRNA水平的影响与对照组相比,模型组小鼠肝脏CYP2E1的活性在4、8、16 h三个时间点分别升高了47.38%、61.96%和17.87%(P<0.01)。与模型组相比,,低中高剂量大蒜油组CYP2E1活性在4h时间点分别下降33.64%、38.57%和39.53%(P<0.01),在8h时间点分别下降了52.85%、58.95%和62.26%(P<0.01),在16h时间点分别下降了25.14%、30.48%和41.75%(P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏CYP2E1的蛋白水平在4、8 h两个时间点分别增加了44.44%和141.61%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠CYP2E1的蛋白水平在4 h时间点分别下降了44.32%、70.96%和80.26%(P<0.01),在8h时间点分别下降了27.86%、40.88%和59.98%(P<0.01),在16h时间点分别下降了44.38%、72.67%和88.42%(P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏CYP2E1的mRNA水平在4、16 h时间点分别下降了67.88%和26.83%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏CYP2E1 mRNA水平在4h时间点分别增加了311.24%、191.11%和54.75%(P<0.01),在8h时间点分别增加了36.25%、65.71%和153.15%(P<0.01),在16h时间点分别增加了64.04%、54.78%和26.44%(P<0.05)。3.3大蒜油对小鼠肝脏CYP1A2活性和蛋白水平的影响与对照组相比,模型组小鼠肝脏CYP1A2的活性在4、8、16 h时间点无显著改变(P>0.05),低高剂量大蒜油组小鼠肝脏CYP1A2的活性在4h时间点分别增加了47.51%(P<0.05)和56.76%(P<0.01)；在8、16 h两个时间点,各组别小鼠肝脏CYP1A2活性未见显著差异(P>0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏CYP1A2蛋白水平在4、8、16 h三个时间点无显著改变(P>0.05)。与模型组相比,高剂量大蒜油组小鼠肝脏CYP1A2蛋白水平在4 h时间点增加了41.74%(P<0.01),低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏CYP1A2蛋白水平在16h时间点分别降低了48.17%、45.04%和23.98%(P<0.01)。3.4大蒜油对小鼠肝脏CYP3A活性和蛋白水平的影响大蒜油和乙醇对小鼠肝脏CYP3A的活性无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏中CYP3A的蛋白水平在4、8、16 h三个时间点未见明显的改变(P>0.05),高剂量大蒜油组小鼠CYP3A蛋白水平在4h时间点增加了13.57%(P<0.05),低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏CYP3A蛋白水平在8h时间点分别增加了17.25%、16.54%和49.39%(P<0.05或<0.01)。3.5给予1次和60 d大蒜油对CYP2E1、1A2、3A活性和蛋白水平影响的比较与各自对照组相比,给予1次大蒜油(100 mg/kg bw)和连续给予60 d大蒜油(100 mg/kg bw)组小鼠肝脏CYP2E1的蛋白水平分别下降了88.41%和60.60%(P<0.01)；给予1次大蒜油和60 d大蒜油分别使小鼠肝脏CYP2E1的活性下降了33.22%(P<0.01)和22.25%(P<0.05)。与各自对照组相比,给予1次大蒜油和连续给予60 d大蒜油组小鼠肝脏CYP1A2的蛋白水平分别下降了70.76%和41.49%(P<0.01)；给予1次大蒜油小鼠肝脏CYP1A2的活性下降了23.71%(P<0.05),而给予60d大蒜油小鼠肝脏CYP1A2的活性未见显著改变(P>0.05)。给予1次和连续给予60 d大蒜油对于小鼠肝脏CYP3A的蛋白水平和活性均无显著影响(P>0.05)。4.大蒜油对小鼠急性酒精性脂肪肝各因素的影响4.1大蒜油对血清中VLDL含量的影响大蒜油和乙醇对小鼠血清中VLDL含量均无显著影响(P>0.05)。4.2大蒜油对乙醇所致的NAD+/NADH的比值的影响与对照组相比,模型组小鼠肝脏NAD+/NADH比值下降了23.20%(P<0.01)。与模型组比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏NAD+/NADH比值分别增加了11.42%(P>0.05)、24.67%(p<0.01)和26.19%(P<0.01)。4.3大蒜油对血清和肝脏中FFA水平的影响与对照组相比,模型组小鼠血清FFA水平在16 h时间点增加了17.91%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠血清FFA水平分别下降了19.69%、31.76%和29.08%(P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏FFA水平在8h时间点增加了43.92%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏FFA水平在4h时间点分别降低了9.87%、13.09%和13.48%(P>0.05),在8h时间点分别降低了14.56%(P>0.05)、24.85%(P<0.01)和21.13%(P<0.05),在16h时间点分别降低了16.54%(P>0.05)、20.63%(P<0.05)和25.25%(P<0.05)。4.4大蒜油对血清中脂联素和TNF-a水平的影响与对照组相比,模型组小鼠血清脂联素的水平在4、8、16 h三个时间点分别降低了75.62%、17.07%和30.69%(P<0.05或<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠血清脂联素的水平在4h时间点分别升高178.42%、248.07%和248.34%(P<0.01),在16 h时间点分别升高了22.87%、22.22%和31.69%(P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠血清TNF-a水平在4、8 h时间点分别增加了105.45%和45.54%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠血清的TNF-a水平在4h时间点分别下降了32.38%、46.63%和41.53%(P<0.01),在8h时间点分别下降了7.50%(P>0.05)、22.56%(P<0.05)和16.72%(P<0.01)。在16 h时间点,各组小鼠血清TNF-α水平无显著差异(P>0.05)。4.5大蒜油对小鼠肝脏mature SREBP-1、PPAR-α、p-AMPK、p-ACC、FAS蛋白水平的影响与对照组相比,模型组小鼠肝脏mSREBP-1蛋白水平在8、16 h两个时间点分别增加了24.39%和10.91%(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏mSREBP-1蛋白水平在8h时间点分别降低了34.28%、45.41%和53.53%(P<0.01),在16h时间点分别降低16.99%、29.52%和47.76%(P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏PPAR-a的蛋白水平在4、8 h时间点分别降低了27.13%和51.14%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏PPAR-a蛋白水平在4h时间点分别增加了78.83%、105.45%和120.04%(P<0.01),在16h时间点分别增加了69.52%、62.66%和70.22%(P<0.01)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏p-AMPK蛋白水平在8h时间点增加46.70%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏p-AMPK的蛋白水平在4h时间点分别增加了26.97%、56.31%和86.89%(P<0.05或<0.01)。在8h时间点,低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏p-AMPK的蛋白水平亦高于对照组,但低于模型组。在16h时间点,各组小鼠肝脏p-AMPK的蛋白水平无显著差异(p>0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏p-ACC蛋白水平在4h时间点下降了17.65%(P<0.01),在8h时间点增加了80.91%(P<0.01)。与模型组相比,低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏p-ACC的蛋白水平在4h时间点分别增加了32.48%、19.64%和47.89%(P<0.05或P<0.01)。在8h时间点,大蒜油组小鼠肝脏p-ACC蛋白水平较对照组亦显著增加(P<0.05),但低于模型组水平。在16h时间点,各组别小鼠肝脏中p-ACC蛋白的水平无显著的统计学差异(P>0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏FAS的蛋白水平在8h时间点增加了12.93%(P<0.05)；低中高剂量大蒜油组小鼠肝脏FAS的蛋白水平在4h时间点分别降低了40.00%、53.45%和70.06%(P<0.01),在8h时间点分别降低了36.87%、47.55%和66.83%(P<0.01),在16h时间点分别降低10.62%、35.59%和52.12%(P<0.01)。5.大蒜油对乙醇损伤L02细胞的影响55.1大蒜油对L02细胞培养液中转氨酶活性和TG含量的影响大蒜油显著抑制了100 mM的乙醇所致L02细胞培养液中转氨酶活性和TG含量的升高。与对照组相比,乙醇组细胞培养液中ALT、AST的活性和TG的含量分别升高了34.10%(P<0.05)、33.99%(P<0.01)和145.74%(P<0.01)。与乙醇组相比,三个大蒜油和乙醇联合处理组ALT的活性分别降低了21.23%(P<0.05)、28.71%(P<0.05)和31.09%(P<0.01)；AST的活性分别下降了15.05%(P<0.01)、22.37%(P<0.01)和1123.01%(P<0.01)；TG的水平分别下降了15.12%、37.35%(P<0.01)和35.80%(P<0.01)。5.2大蒜油对L02细胞中MDA和GSH含量的影响与对照组相比,乙醇组L02细胞中MDA含量增加了95.23%(P<0.01),GSH的含量减少了20.80%(P<0.01)；三个大蒜油与乙醇联合处理组L02细胞中MDA的水平分别下降了28.86%、31.30%和46.26%(P<0.01)；GSH含量分别较乙醇组增加了36.67%(P<0.01)、55.39%(P<0.01)和115.34%(P<0.01)；10 mg/L单独应用组细胞GSH的水平与对照组相比增加了68.47%(P<0.01)。5.3大蒜油对L02细胞中脂肪含量的影响与对照组相比,乙醇组L02细胞中TG含量增加了37.71%(P<0.01)；与乙醇组相比,5、10 mg/L大蒜油与乙醇联合处理组L02细胞中TG含量分别降低了12.94%(P<0.05)和19.51%(P<0.01)。油红O染色结果显示,乙醇组L02细胞中可见较多的红色的脂肪着色；对照组和大蒜油组未见明显的脂肪着色；大蒜油和乙醇共处理组脂肪变性程度较乙醇组明显减轻。5.4大蒜油对L02细胞中CYP2E1和Caspase-3蛋白含量的影响与对照组相比,大蒜油组CYP2E1蛋白水平下降了13.40%(P<0.05),乙醇组CYP2E1蛋白水平增加了36.27%(P<0.01)；与乙醇组相比,三个大蒜油和乙醇联合应用组CYP2E1蛋白水平分别降低了10.43%(P<0.05)、17.71%(P<0.01)和18.70%(P<0.01)。与对照组相比,乙醇组caspase-3蛋白水平显著增加了27.47%(P<0.01)；与乙醇组相比,三个大蒜油和乙醇联合应用组caspase-3的蛋白水平分别降低了8.30%、13.81%(P<0.01)和15.28%(P<0.01)。结论1.一定剂量的大蒜油可有效拮抗4.8 g/kg bw乙醇所致小鼠急性肝损伤和100mM乙醇所致的L02细胞损伤。2.大蒜油可通过提高机体抗氧化能力抵抗急性酒精所致的氧化应激,维持线粒体的正常功能；抗氧化活性是大蒜油发挥拮抗急性酒精性肝损伤的机制之一。3.大蒜油拮抗急性酒精性肝损伤的作用可能与其显著抑制CYP2E1的活性和蛋白水平有关。4.大蒜油拮抗急性酒精所致的肝脏脂肪蓄积,可能与其增强了脂肪酸的氧化代谢和减少脂肪酸的合成有关。5.一定剂量的大蒜油对CYP2E1和1A2的抑制作用会随着给予时间的延长而逐渐减弱。6.一定剂量的大蒜油对CYP3A无显著影响。