目的：食源性致病菌污染是影响我国食品安全的最主要因素之一。本研究项目的总体目标旨在以单核细胞增生性李斯特菌等食源性致病菌为靶标物，获得高亲和力、高特异性免疫球蛋白G（IgG），并为建立食源性致病菌快速检测方法提供研究思路和理论支撑。分目标是利用免疫学技术得到可识别单核细胞增生性李斯特菌表位的高亲和力、高特异性免疫球蛋白G（IgG），建立以磁分离技术为主要富集手段的样品前处理方法，建立以化学发光检测为信号放大的灵敏检测技术，最终建立高特异性、高灵敏性的食源性致病菌快速检测方法。　　方法：⑴利用经典免疫学方法制备食源性单核细胞增生性李斯特菌等灭活全菌抗原，作为抗体制备中的免疫原及后期检测中的标准抗原（目标物）；⑵应用食源性致病菌灭活全菌抗原免疫雄性家兔制备相应目标物的抗血清，待抗血清效价达到一定水平后行颈总动脉采血，分离抗血清，应用辛酸-硫酸铵法、Protein A亲和层析法进行多克隆抗体的初级纯化和二级纯化；⑶应用商业化磁性微球抗体偶联试剂盒将纯化的兔源多克隆抗体与磁性微球进行偶联，优化偶联条件，获得具有特异性识别能力的免疫磁球；⑷应用双抗夹心免疫检测法检测单核细胞增生性李斯特菌，应用化学发光法进行定量检测，应用正交设计优化主要反应条件，建立标准曲线，测试灵敏性与特异性。　　结果：①在免疫后的家兔体内成功分离出抗单核细胞增生性李斯特菌的血清，抗血清效价可达1:64000~1:128000，抗血清特异性良好，仅对英诺克李斯特菌和威尔斯李斯特菌有轻微非特异性反应；②通过辛酸-硫酸铵法、Protein A亲和层析法纯化抗血清，得到高纯度兔源性抗单核细胞增生性李斯特菌多克隆抗体，多抗效价可达1:6400~1:12800；③通过正交实验优化的反应条件为37℃条件下，免疫磁珠用量20μL、含0.1%BSA的PBS封闭15min，捕获抗原2h，辣根过氧化物酶标记的抗单核细胞增生性李斯特菌单抗稀释至1：10000特异性结合反应30min后进行化学发光检测，标准曲线拟合优度0.954，在无前期增菌条件下最低检出限为103CFU/mL，特异性良好，检测时限为3~4h。　　结论：⑴能够在3个月内获得高亲和能力、高特异性的兔源性抗单核细胞增生性李斯特菌多克隆抗体，建立了针对食源性致病菌检测抗体制备方法；⑵应用磁分离技术建立了简单快速富集食源性致病菌的样品前处理方法；⑶建立了一个操作简便、快速的化学发光磁酶免疫分析检测单核细胞增生性李斯特菌的方法。