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磷脂酶A2在急性坏死性胰腺炎大鼠肾上腺损伤的作用研究目的：临床资料显示急性重症胰腺炎与肾上腺功能不全存在某种联系。肾上腺皮质功能不全的基本病理生理学可能与肾上腺水肿、出血、坏死有关。我们假设受损的肾上腺反应是肾上腺实质出血、坏死导致的,并探索其发生机制：(1)建立实验性ANP大鼠模型,观察肾上腺束状带病理形态、超微结构和肾上腺功能(血清皮质酮)的变化；(2)sPLA2是炎症网络中的关键因子,观察sPLA2在ANP大鼠血清和肾上腺组织的表达变化；(3)探索sPLA2抑制剂对ANP肾上腺损伤的保护作用。方法：采用雄性Wistar大鼠,通过胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液建立ANP大鼠模型。假手术组开腹后仅翻动胰腺和十二指肠。分别设立0h(基础值)、3h、6h、12h、24h时间点。观察各大鼠胰腺、肾上腺大体观和血清淀粉酶、腹水的改变,称量、计算肾上腺／体重指数,Elisa法检测血清皮质酮水平,光镜下观察肾上腺病理形态,透射电镜下观察肾上腺皮质细胞超微结构。采用全自动生化分析仪检测大鼠血清和肾上腺组织匀浆的sPLA2活性,免疫组化和蛋白印迹法检测肾上腺sPLA2-ⅡA蛋白的表达。在造模前30min静脉给予大鼠sPLA2抑制剂(pku-mdl-101),并观察sPLA2抑制剂对ANP及其肾上腺损伤的影响。结果：1.大鼠逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠溶液后,血清淀粉酶升高,胰腺组织HE染色出现出血、坏死等病理变化,表明ANP模型建立。ANP大鼠随病程进展,肾上腺体重指数逐步增加。ANP大鼠血清皮质酮3h显著增高,6h、12h逐渐降低,24h血清皮质酮水平甚至低于正常大鼠,出现肾上腺功能障碍。光镜下,肾上腺组织病理学可见3h时肾上腺组织水肿,血窦明显扩张、充血,6h逐步加重,随病程进展,24h出现肾上腺腺体结构紊乱、出血、及肾上腺细胞坏死、变性。电镜下,肾上腺皮质细胞可出现细胞间裂隙,线粒体肿胀,内质网泡状扩张,胞浆类脂滴减少等超微结构变化。假手术组大鼠血清皮质酮、肾上腺病理形态、超微结构未见明显变化。2.ANP大鼠血清sPLA2活性3h迅速升高,6h达峰值,后逐渐降低。肾上腺组织匀浆sPLA2活性也随时间进展逐渐增强,3h显著升高,6h达到峰值。假手术组大鼠血清、肾上腺组织sPLA2活性维持低水平,各时间点几乎无明显变化。ANP大鼠各时间点相应与假手术组比较,sPLA2活性有统计学差异(P<0.05)。IIA型分泌型磷脂酶A2 (sPLA2-ⅡA)免疫组化显示,肾上腺皮质、髓质,胞膜、胞浆以及细胞间基质呈淡黄色,表明sPLA2-ⅡA在肾上腺广泛表达。模型组与假手术组各相应时间点比较,肾上腺皮质组织sPLA2-ⅡA表达明显增强。3. sPLA2抑制剂预处理可显著缓解ANP大鼠血清淀粉酶和胰腺组织病理评分(P<0.05,与ANP组比较),减轻肾上腺组织病理损伤(P<0.05,与ANP组比较),改善24h血清皮质酮水平(P<0.05,与ANP组比较),有效抑制肾上腺组织的sPLA2活性和sPLA2-ⅡA蛋白的表达(P<0.05,与ANP组比较)。结论：1.ANP大鼠随其病程进展,出现肾上腺水肿、腺体结构紊乱、出血、坏死和超微结构的变化,合并肾上腺功能不全。肾上腺损伤可导致肾上腺功能不全。2. sPLA2-ⅡA在大鼠。肾上腺组织各区带存在广泛弱表达,ANP大鼠血清和肾上腺组织sPLA2活性升高,肾上腺皮质sPLA2-ⅡA表达增强,提示sPLA2-ⅡA可能参与了ANP相关性肾上腺损伤过程。3. sPLA2抑制剂可以有效缓解ANP严重程度,并在胰腺炎相关性肾上腺损伤中发挥保护作用。sPLA2在ANP肾上腺损伤机制中发挥重要的作用。