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背景和目的:赖氨酸特异性去甲基化酶1(lysine-specific demethylase 1,LSD1)是2004年发现的一种黄素腺嘌呤二核苷酸(Flavin adenine dinulcleotide,FAD)依赖性胺氧化酶,它能通过氧化反应生成甲醛而特异性去除组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4)和第9位赖氨酸(H3K9)的甲基化修饰,调控着基因转录的激活与抑制,发挥重要的生物学功能。最近的研究显示LSD1在肿瘤的发生、发展、增殖及迁移侵袭中扮演重要的角色。目前已有研究报道LSD1在卵巢癌组织和细胞株中高度表达,而与卵巢癌细胞增殖关系尚不明确。因此,本研究以卵巢癌细胞HO8910为研究对象,探索LSD1基因过表达、敲低及其酶活性抑制对HO8910细胞增殖、周期和凋亡的影响,以及对细胞增殖和凋亡相关基因表达的调节作用。方法:1.利用慢病毒载体构建稳定干扰LSD1的卵巢癌HO8910细胞株,首先合成特异性针对LSD1基因的shRNA,插入pLKO-Tet-On载体,构建重组慢病毒质粒p LKO-Tet-On-shLSD1;然后将pLKO-Tet-On-shLSD1、pHR’-CMV-8.2ΔVPR和pHR’-CMV-VSVG三种质粒共转染293T细胞,转染试剂采用Lipofectamine2000包装产生慢病毒;再将携带有LSD1-shRNA的慢病毒感染HO8910细胞,采用嘌呤霉素筛选LSD1-shRNA稳定转入的HO8910细胞。2.构建稳定过表达LSD1的卵巢癌细胞株,首先用Lipofectamine2000将pLVX-Tet-On、pHR’-CMV-8.2ΔVPR及pHR’-CMV-VSVG三种质粒共转染293T细胞,收集病毒上清感染HO8910细胞,采用G418筛选细胞得到稳定的HO8910-rtTA细胞;再用包含p LVX-tight-puro-LSD1的慢病毒颗粒感染HO8910-rtTA细胞,用嘌呤霉素筛选细胞得到稳定转染过表达LSD1细胞株。3.用实时定量RT-PCR和Western blot法分别检测LSD1干扰(LSD1-knockdown,LSD1-KD)和过表达(LSD1-overexpression,LSD1-OE)的HO8910细胞中LSD1 mRNA和蛋白的表达及其底物H3K4me2表达水平。4.利用不同浓度(0、25、50、100μmol/L)LSD1特异性抑制剂tranylcypromine(TCP)处理HO8910细胞,采用MTT法和EdU DNA标记法检测细胞的增殖;在LSD1-KD和LSD1-OE HO8910细胞中,加入不同浓度(0、1、10、100 ng/m L)doxycycline(Dox)诱导LSD1敲低或过表达后,检测细胞增殖的变化。5.采用Annexin V/PI和流式细胞仪分别检测上述不同处理组中细胞凋亡和细胞周期的变化。6.利用Western blot法检测不同处理组细胞中P21、Bax、Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平。结果:成功建立了稳定干扰LSD1和过表达LSD1的卵巢癌HO8910细胞株;干扰LSD1基因表达或抑制LSD1酶活性,能够显著抑制HO8910细胞的增殖和促进细胞的凋亡(P﹤0.05);而LSD1过量表达,则显著促进HO8910细胞的增殖及抑制细胞的凋亡。此外,LSD1表达下调诱导细胞周期阻滞在G1期,并下调促存活蛋白Bcl-2和Survivin的表达,以及上调促凋亡蛋白P21和Bax表达;相反,外源性表达LSD1能够促进HO8910细胞G1/S期转化,并上调Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平,以及下调P21和Bax蛋白的表达。结论:抑制及干扰人卵巢癌HO8910细胞的LSD1能有效抑制细胞的生长和增殖,使细胞阻滞在G1期,促进细胞凋亡;而外源性表达LSD1能够增强细胞的增殖,促进细胞G1/S期转化,抑制细胞的凋亡。我们的研究结果提示,LSD1可能是卵巢癌治疗新的靶点。