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肉种鸡饲养周期延长导致的生产性能、种蛋质量和子代生产性能下降与卵巢氧化应激相关。同时,种蛋储存条件是影响种蛋质量的关键因素之一,延长种蛋储存时间降低了种蛋孵化性能、雏鸡质量和子代生产性能,这可能是胚胎在种蛋储存过程中发生了氧化应激反应。维生素E(VE)在缓解机体氧化损伤的过程中发挥重要作用。本文通过3个试验,以“种鸡—种蛋—子代肉鸡”为主线,系统研究了饲粮VE水平对种鸡产蛋性能、种蛋质量和子代生产性能的影响,并进一步探讨了肉种鸡饲粮添加VE延长种蛋储存时间的营养效应及可能机制。试验1饲粮维生素E水平对肉种鸡产蛋性能和抗氧化能力的影响本试验包括试验1-1和1-2。试验1-1选用71 wk Ross 308肉种母鸡512只,试验期13 wk;共2个处理(饲粮VE水平为6和100 mg/kg),每个处理8个重复,每个重复32只。结果显示,饲粮VE水平对产蛋性能无影响(P>0.05)。提高饲粮VE水平提高了卵巢T-SOD活性和T-AOC(P<0.05),降低了卵巢MDA含量(P<0.05)。试验1-2选用75 wk Ross 308肉种母鸡576只,试验期12 wk;共3个处理(饲粮VE水平为100、200和400 mg/kg),每个处理6个重复,每个重复32只。结果显示,饲粮VE水平对产蛋性能无影响(P>0.05)。400 mg/kg VE组血清T-AOC高于100和200 mg/kg VE组(P<0.05),200 mg/kg VE组卵巢MDA含量低于100 mg/kg VE组(P<0.05)。综上可知,以产蛋性能为评价标识,NRC(1994)推荐的肉种鸡饲粮VE水平(6 mg/kg)满足70 wk后老龄母鸡需要;提高饲粮VE水平(100、200和400 mg/kg)对延长饲养周期(>70 wk)的肉种鸡产蛋性能无影响。肉种鸡饲粮VE水平提高至100 mg/kg可提高种鸡卵巢抗氧化能力。试验2肉种鸡饲粮维生素E水平和种蛋储存时间对种蛋质量的影响及机制研究本试验包括试验2-1和2-2。试验2-1采用2×2因子试验设计,主效应包括种鸡饲粮VE水平(6和100 mg/kg)和种蛋储存时间(0和14 d)。试验共4个处理,每个处理6个重复,种蛋收集时间为试验1-1肉种鸡饲养第8、10和12 wk。种蛋储存温度分别为8 wk:22-24℃;10 wk储存1-7和8-14 d:22-24℃和16-18℃;12 wk:16-18℃。结果显示,延长种蛋储存时间降低了种蛋常规蛋品质和蛋黄T-AOC(P<0.05);降低了入孵蛋和受精蛋孵化率、雏鸡重量、健雏率和入舍鸡产健雏数(P<0.05);降低了10和12 wk雏鸡大脑MDA含量和T-AOC(P<0.05);提高了种蛋储存失重率、孵化1-7和15-21.5 d胚胎死亡率(P<0.05);提高了8 wk雏鸡血清、大脑和卵黄囊MDA含量和T-AOC(P<0.05);提高了10 wk雏鸡血清MDA含量和T-AOC(P<0.05);提高了12 wk雏鸡血清T-AOC和卵黄囊MDA含量(P<0.05)。提高种鸡饲粮VE水平提高了蛋黄α-生育酚含量和T-AOC(P<0.05);提高了入孵蛋和受精蛋孵化率(P<0.05);提高了雏鸡血清和卵黄囊T-SOD活性和T-AOC(P<0.05);降低了孵化1-7 d胚胎死亡率(P<0.05);降低了蛋黄以及雏鸡血清、大脑和卵黄囊MDA含量(P<0.05)。相对于未储存种蛋,种蛋在储存14 d条件下,提高种鸡饲粮VE水平表现出更强的改善种蛋孵化性能和雏鸡抗氧化能力的效应。进一步分析发现,延长种蛋储存时间降低了孵化3 d和7 d胚胎重量(P<0.05);提高了孵化7 d胚胎T-AOC(P<0.05);提高了孵化3 d和7 d胚胎ROS含量(P<0.05);提高了孵化3 d和7 d胚胎以及雏鸡大脑和肝脏细胞凋亡率(P<0.05)。提高种鸡饲粮VE水平降低了孵化7 d胚胎MDA含量(P<0.05);降低了雏鸡肝脏和大脑ROS含量(P<0.05);降低了孵化3 d和7 d胚胎以及雏鸡大脑细胞凋亡率(P<0.05)。提高种鸡饲粮VE水平表现出更强的降低储存种蛋孵化7 d胚胎MDA含量和雏鸡肝脏细胞凋亡率的正向效应。胚胎转录组分析结果显示,种鸡饲粮VE水平和种蛋储存时间对胚胎死亡率的影响与氧化应激、细胞凋亡、细胞增殖分化和胚胎发育相关通路有关。功能基因集和m RNA定量结果显示,种鸡饲粮添加VE和种蛋储存时间单独或交互地调控氧化应激、细胞凋亡、细胞增殖分化和胚胎发育相关基因表达,包括Ogg1、Gst、Sod3、Selenop1、Mt3、Pon2、Nrf2、Col6a、G0s2、Wnt11、Bok、Casp3、Bax、Bcl2和Hspb8。试验2-2种蛋均来自试验1-2,包括9 wk未储存和12 wk储存(储存14 d:温度16-18℃)种蛋,均包括3个处理(种鸡饲粮VE水平:100、200和400mg/kg)。结果显示,随着饲粮VE水平提高,未储存和储存种蛋蛋黄α-生育酚含量和T-AOC提高,MDA含量降低(P<0.05);提高饲粮VE水平提高了储存种蛋入孵蛋和受精蛋孵化率、入舍鸡产健雏数以及雏鸡组织T-AOC(P<0.05);降低了储存种蛋孵化1-7 d胚胎死亡率、孵化7 d胚胎以及雏鸡MDA含量(P<0.05)。综上可知,延长种蛋储存时间(14 vs.0 d)能够抑制胚胎发育,降低种蛋孵化性能以及蛋黄、胚胎和雏鸡抗氧化能力;提高种鸡饲粮VE水平能够缓解种蛋储存诱导的孵化性能下降。种鸡饲粮VE水平和种蛋储存时间对孵化性能的影响涉及氧化应激、细胞凋亡、细胞增殖分化和胚胎发育等显著性富集通路。氧化应激相关基因Ogg1、Gst、Sod3、Selenop1、Mt3、Pon2和Nrf2以及细胞凋亡和增殖相关基因Col6a、G0s2、Wnt11、Bok、Casp3、Bax、Bcl2和Hspb8可能是调控种鸡饲粮VE缓解种蛋储存诱导的胚胎氧化应激以及孵化性能下降的关键基因。以未储存种蛋孵化性能为评价标识,NRC(1994)推荐水平(6 mg/kg)满足需要;在种蛋储存时间延长的条件下,肉种鸡饲粮VE添加水平至少应达到200 mg/kg。试验3肉种鸡饲粮维生素E水平和种蛋储存时间对子代生产性能和抗氧化能力的影响本试验包括试验3-1、3-2、3-3、3-4和3-5。试验3-1、3-2和3-3种蛋均来自试验1-1。试验3-1采用2×2因子试验设计,主效应包括种鸡饲粮VE水平(6和100 mg/kg)和种蛋储存时间(0和14 d),共4个处理,每个处理8个重复,子代饲粮VE水平为100 mg/kg。试验1-1第10 wk种蛋(储存0 d)和8 wk种蛋(储存14 d;温度22-24℃)孵化后,将各处理组1 d雏鸡混合,从中随机选择104只分配到8个重复,每个重复13只(公5,母8)。在21 d称重后,将处理组内各重复内公母分开,调整为公母各4个重复。结果显示,延长种蛋储存时间降低了子代肉鸡21和42 d体重以及8-21 d、1-21 d和22-42 d体增重和采食量(P<0.05);降低了子代公鸡21和42 d肝脏T-SOD活性(P<0.05);提高了1-7 d料重比(P<0.05);提高了子代母鸡7 d肝脏和血清MDA含量(P<0.05)。提高种鸡饲粮VE水平降低了1-7 d料重比(P<0.05);提高了子代公鸡21 d血清T-SOD活性(P<0.05)。延长种蛋储存时间降低了公鸡42 d体重和22-42 d体增重(P<0.05),对母鸡无影响(P>0.05)。提高种鸡饲粮VE水平降低了储存14 d种蛋孵化子代母鸡7 d血清MDA含量和孵化子代肉鸡42 d血清MDA含量,对储存0 d种蛋孵化子代肉鸡无影响(P<0.05)。试验3-2采用2×2因子试验设计,主效应包括种鸡饲粮VE水平(6和100 mg/kg)和种蛋储存时间(0和14 d),共4个处理,每个处理8个重复,子代饲粮VE水平为100 mg/kg。试验1-1第12 wk种蛋(储存0 d)和10 wk种蛋(储存14 d;储存1-7 d和8-14 d温度分别为22-24℃和16-18℃)孵化后,将各处理组1 d雏鸡混合,从中随机选择128只分配到8个重复,每个重复16只(公7,母9)。在7 d称重后,将处理组内各重复内公母分开,调整为公母各4个重复。结果显示,延长种蛋储存时间降低了子代肉鸡7和42 d体重以及1-7 d体增重和采食量(P<0.05);提高了子代母鸡7 d血清、子代肉鸡21 d血清和子代肉鸡42 d肝脏MDA含量(P<0.05)。提高种鸡饲粮VE水平降低了子代公鸡7 d血清MDA含量(P<0.05),提高了子代肉鸡42 d血清T-SOD活性(P<0.05)。提高种鸡饲粮VE水平提高了储存14 d种蛋孵化子代公鸡7 d血清T-SOD活性(P<0.05),降低了储存14 d种蛋孵化子代母鸡7 d肝脏MDA含量(P<0.05),对储存0 d种蛋孵化子代无影响(P>0.05)。试验3-3采用2×2因子试验设计,主效应包括种鸡饲粮VE水平(6和100 mg/kg)和种蛋储存时间(0和14 d),共4个处理,每个处理8个重复,子代饲粮VE水平为100 mg/kg。试验1-1第14 wk种蛋(储存0 d)和12 wk种蛋(储存14 d;温度16-18℃)孵化后,将各处理组1 d雏鸡混合,从中随机选择160只分配到8个重复(公母各4个重复),每个重复20只。结果显示,延长种蛋储存时间降低了子代肉鸡42 d体重、22-42 d和1-42 d体增重以及8-21 d、22-42 d和1-42 d采食量(P<0.05);提高了子代肉鸡21 d血清以及42 d血清和肝脏MDA含量(P<0.05)。提高种鸡饲粮VE水平降低了子代肉鸡7 d血清MDA含量(P<0.05)。提高种鸡饲粮VE添加水平降低了储存14 d种蛋孵化子代肉鸡21 d血清MDA含量(P<0.05),对储存0 d种蛋孵化子代肉鸡无影响(P>0.05)。试验3-4和3-5种蛋均来自试验1-2。试验3-4采用3×2因子试验设计,包括3个种鸡饲粮VE水平(100、200和400 mg/kg)和2个子代饲粮VE水平(0和35 mg/kg),共6个处理,每个处理6个重复,每个重复20只(公母各半)。试验1-2第9 wk未储存种蛋孵化后,将各母源处理组1 d雏鸡混合后分组,试验共42 d。结果显示,种鸡饲粮VE水平(100、200和400 mg/kg)和子代饲粮VE水平(0和35 mg/kg)对子代生产性能无影响(P>0.05)。试验3-5采用单因子试验设计。试验1-2第12 wk储存种蛋孵化后,将各母源处理组1 d雏鸡混合后分组。试验共3个处理(种鸡饲粮VE水平:100、200和400 mg/kg),每个处理5个重复,每个重复26只(公12;母14)。子代饲粮均不添加VE。结果显示,提高种鸡饲粮VE水平提高了子代肉鸡21、28、35和42 d体重以及15-21和1-42 d体增重(P<0.05);提高了子代肉鸡血清和肝脏T-SOD活性以及肝脏T-AOC(P<0.05);降低了子代肉鸡8-14 d和15-21 d料重比(P<0.05)以及子代肉鸡肝脏MDA含量(P<0.05)。综上可知,延长种蛋储存时间降低子代肉鸡生产性能和抗氧化能力,种蛋储存温度越高,影响越大。当子代饲粮VE添加水平为100 mg/kg时,提高种鸡饲粮VE水平(100 vs.6 mg/kg)有利于雏鸡早期生长发育,能部分缓解种蛋储存时间诱导的子代肉鸡抗氧化能力下降。当子代饲粮不额外添加VE时,提高种鸡饲粮VE水平(100、200和400 mg/kg)能提高储存种蛋孵化子代生产性能和抗氧化能力,种鸡饲粮VE添加水平应不低于200 mg/kg。综合结论:1.以产蛋性能和孵化性能作为评价标识,NRC(1994)推荐的肉种鸡VE水平(6 mg/kg)满足延长饲养周期(>70 wk)肉种鸡需要。提高饲粮VE水平(100、200和400 mg/kg)对延长饲养周期(>70 wk)肉种鸡产蛋性能、种蛋孵化性能和子代生产性能无影响,但能增强种鸡、种蛋和雏鸡抗氧化能力。2.以种鸡抗氧化能力以及子代生产性能作为评价标识,延长饲养周期(>70 wk)肉种鸡饲粮VE添加水平可设置为100 mg/kg。3.延长种蛋储存时间增加胚胎死亡率,降低孵化性能、雏鸡质量和子代生产性能。提高种鸡饲粮VE水平缓解种蛋储存诱导的孵化性能下降,涉及氧化应激、细胞凋亡、细胞增殖分化和胚胎发育等显著性富集通路。氧化应激基因Ogg1、Gst、Sod3、Selenop1、Mt3、Pon2和Nrf2以及细胞凋亡和增殖基因Col6a、G0s2、Wnt11、Bok、Casp3、Bax、Bcl2和Hspb8可能是参与其中的关键基因。4.以孵化性能和子代生产性能为评价标识,在种蛋储存时间延长至14天和子代饲粮不额外添加VE条件下,种鸡饲粮VE添加水平应不低于200 mg/kg。