肉灵芝中微生物和多糖提取及抗炎抗氧化研究

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肉灵芝又称太岁,是一种特殊结构成分的物质,具有广阔的开发背景。本文以长白山肉灵芝为原料,通过高通量筛选测序得出组织结构成分,并确定长白山肉灵芝中有益菌株;通过超声辅助提取法提取长白山肉灵芝多糖,并基于长白山肉灵芝多糖进行抗氧化分析,应用HSCCC分离纯化系统进行分离纯化;通过生物培养基对长白山肉灵芝提取物进行固体、半固体、液体培养基进行组织培养,并考察组织分化情况。研究内容如下:利用单因素实验确定长白山肉灵芝多糖提取影响因子,响应面法优化超声提取工艺,并对提取多糖进行分离纯化,分离纯化后进行抗氧化分析。结果如下:提取温度51.63℃,超声时间4.11h,超声功率286.32W,固液比1:31.89 g/m L。此条件下长白山肉灵芝水提物的提取率最大为10.2796%。通过HSCCC分离纯化系统进行分离纯化,分离纯化230min内,分别在110min、125min、205min出现峰值,并命名为CBG1、CBG2、CBG3,得到初步分离纯化产物。利用还原力测定实验与自由基清除实验表明长白山肉灵芝多糖有明显抗氧化能力,且CBG3能力最强,CBG1能力最弱。对长白山肉灵芝进行高通量测序技术分析研究,确定长白山肉灵芝中微生物并构建抗炎模型,以MTT法检测细胞存活率进行抗炎分析。结果如下:长白山肉灵芝微生物分为细菌多样性真菌多样性,并确定其细菌多样性主要可培养物质为乳杆菌、罗姆布茨菌属、罗伊氏乳杆菌属、柄杆菌属;其真菌多样性主要可培养物质为可培养物质为镶刀菌属、汉纳酵母属等。在不同剂量浓度下,细胞存活率均保持在90%以上,表明长白山肉灵芝筛选微生物对细胞没有毒性作用。通过Griess法测定NO的释放量,ELISA法检测IL-6、IL-1?及PGE2的释放量。提取物对现有模型释放水平都有显著的抑制作用(P<0.05),实验表明长白山肉灵芝提物可以减轻炎症发生发挥抗炎作用。通过对生物培养基中组织培养的研究,利用固体培养基、半固体培养基和液体培养基三种组织培养基。对长白山肉灵芝进行组织培养分析得出,长白山肉灵芝在培养后菌丝分裂不明显,生长迟缓,长白山肉灵芝培养周期长消耗大。
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