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目的:建立SK-N-SH细胞的过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)的氧化损伤模型,初步探讨莫诺苷对细胞氧化损伤的保护作用。方法:(1)采用对数生长期的人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞,给予不同浓度的莫诺苷(1μM,10μM和100μM)预处理24 h,加入H2O2(200-400μM)作用24 h以诱导细胞损伤。(2)在倒置相差显微镜下观察各组SK-N-SH细胞的生长和形态学变化。(3)用MTT法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒检测细胞内LDH的释放量;脂质氧化(MDA)检测试剂盒检测细胞脂质氧化水平;超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒检测细胞内SOD的含量。(4)以活性氧(ROS)检测试剂盒检测细胞内ROS的生成;超氧化物阴离子荧光探针(Dihydroethidium)检测细胞内超氧化物阴离子的水平。(5)应用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测线粒体膜电位(△Ψm)的变化;采用分光光度法检测细胞内Caspase-3活性。(6)通过流式细胞术(FCM)、Hoechst染色分析细胞凋亡。(7)利用Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达变化。(8)利用RT-PCR检测凋亡相关基因的表达。结果:1.MTT细胞活力检测结果显示,H2O2可降低SK-N-SH细胞活力,并呈现出剂量和时间依赖的关系。经过H2O2(200μM)处理24 h后,细胞活力较对照组显著降低,而莫诺苷能明显抑制H2O2导致的SK-N-SH细胞活力下降。2.形态学结果显示,经过H2O2(200μM)处理24 h后,SK-N-SH细胞可出现突起消失、胞体肿胀圆缩、部分细胞发生聚集并破裂成细胞碎片等显著的形态学变化;而莫诺苷的预处理能够减轻这一损伤变化。3.LDH细胞毒性检测结果表明,莫诺苷可减少胞内酶LDH的释放。4.流式细胞术和Hoechst染色的结果表明,莫诺苷可显著抑制H2O2诱导的SK-N-SH细胞凋亡。5.DCFH-DA和Dihydroethidium荧光探针检测结果显示,莫诺苷可有效抑制H2O2诱导的细胞内ROS蓄积。6.脂质氧化检测结果表明,莫诺苷可抑制细胞内的脂质发生过氧化;SOD的检测表明,莫诺苷可显著抑制H2O2诱导的SOD含量的下降。7.JC-1荧光探针和分光光度法的结果显示,莫诺苷可显著抑制H2O2诱导的SK-N-SH细胞线粒体膜电位的下降以及Caspase-3的激活。8.Western blot和RT-PCR的结果显示,莫诺苷可有效抑制H2O2诱导的BAX的表达上调,并促进Bcl-2的表达。结论:莫诺苷可抑制H2O2诱导的SK-N-SH细胞氧化损伤,其机制可能与抑制细胞内氧化应激、抑制H2O2诱导的BAX的表达上调,并促进Bcl-2的表达、阻断线粒体凋亡途径密切相关。