糖化酶是目前重要的工业酶制剂之一,广泛应用于淀粉加工业和发酵工业中。然而,在目前的糖化酶制剂生产过程中常会伴随有一种水解酶副产物—α-葡萄糖苷酶的生成,它可以从低聚糖类底物的非还原末端切开α-1,4糖苷键,释放出葡萄糖或将游离出的葡萄糖残基转移到另一糖类底物形成α-1,6糖苷键,得到非发酵性寡聚糖。α-葡萄糖苷酶的存在影响了糖化酶制剂的质量和纯度,给工业生产带来不便,因此它越来越受到研究者的重视。CICIM F0410是生产糖化酶的工业菌株,本文考察了该菌株产α-葡萄糖苷酶的变化进程与酶学性质,发现该菌株在发酵周期96 h时的α-葡萄糖苷酶产量最高;该酶的最适pH值5.0,最适反应温度55℃,0.5 mM的Mg2+对该酶活有较显著的激活作用,并对其热稳定性有一定的保护作用。对菌株的培养基和发酵条件进行了优化,在保证糖化酶产量的前提下,最大限度的降低α-葡萄糖苷酶的活力。最佳发酵培养基组成(g/L):葡萄糖109,豆饼粉25(添加终浓度0.01 M的NH4Cl),玉米浆31。摇瓶发酵最佳培养条件:培养基初始pH值5.5,种子培养96 h,接种量9%,旋转式摇床34℃培养,摇床转速220 r/min,发酵周期为144 h。通过发酵条件的优化,每1000U糖化酶中α-葡萄糖苷酶的含量降低了53.16%。利用PCR方法扩增到大小为3124 bp的α-葡萄糖苷酶基因,其中编码序列长度为2973 bp,含有三段内含子,推衍得到该段序列编码990个氨基酸残基,其中包括一条含有57个氨基酸残基的信号肽,与GenBank上公布的黑曲霉CBS513.88的α-葡萄糖苷酶基因相似性达到99.94%。构建了用于敲除该基因片段的重组质粒pMD19-aglU::G418,为下一步在基因水平上改造菌株奠定了基础。