目的 构建刚地弓形虫(简称弓形虫)主要表面抗原P30基因两个不同片段的克隆并进行表达，所获重组蛋白纯化后进行弓形虫病诊断的应用性研究。方法 根据弓形虫P30基因的全长序列，设计合成两对引物，用PCR法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出P30基因的两个不同片段，分别构建T-A克隆，经PCR扩增及酶切鉴定后测序，再亚克隆入pMAL-p2质粒并转化DH5α感受态细胞，于氨苄青霉素LB平板上粗筛阳性克隆，再经酶切及PCR扩增鉴定重组子。将重组子转入表达菌BL21，用IPTG诱导表达，表达蛋白以western blot鉴定。用Amylose Resin以亲和层析法纯化所表达的蛋白。以弓形虫RH株感染家兔，用粗抗原和纯化重组抗原以ELISA法比较检测各种寄生虫病患者、感染家兔血清及疟原虫感染小鼠血清。结果 1．成功构建相应的T-A克隆及pMAL-p2亚克隆，经诱导、表达和鉴定，证实2个表达产物均为目的蛋白，其分子量分别为73ku和70ku。2．重组抗原与粗抗原相比，具有相同的敏感性和更高的特异性。结论成功获得弓形虫主要表面抗原P30的2个表达产物，其特异性高于粗抗原，为其应用于人弓形虫感染检测奠定了基础。