背景和目的:近年来,随着城市环境污染、工业发展迅速,新化学物质日益增多,以及不良的行为习惯和生活方式的影响,恶性肿瘤已成为危害人类生存的重大疾病之一。根据全国性死因回顾调查资料表明,20年来我国恶性肿瘤发病率和死亡率呈明显上升趋势,其中肺癌、肝癌、胃癌分别居前三位。其主要致死原因是肿瘤普遍发生转移和复发而缺乏有效的治疗手段。肿瘤细胞不仅自身生长失控,还会经由体内循环系统或者淋巴系统局部入侵到周围的正常组织甚至转移到身体其他部分。实现转移有两个必要因素:一是肿瘤细胞从上皮细胞向间充质细胞转化(EMT),获得侵袭和迁移的能力;二是肿瘤细胞获得干细胞特性,实现自我更新和增殖成瘤。转化生长因子-β1(TGF-β1)是EMT的重要诱导因子,与肿瘤转移、血管新生、病理分期、病人预后密切相关。多种实体肿瘤中,TGF-β1过量表达,将伴有下游分子表达或活性升高,活跃的TGF-β1信号促进了中晚期肿瘤的发展。有文献报道TGF-β1强表达在胃癌的浸润和淋巴结转移中起重要作用,因此肿瘤中高表达的TGF-β1水平在肿瘤的转移和复发中起关键的作用,如果能抑制TGF-β1在胃癌中的高表达水平,将会对肿瘤的治疗提供良好的疗效。AMPK是公认的的抑癌基因。多项研究表明,以二甲双胍为代表的AMPK激活剂(AICAR、苯乙双胍、A769962)具有抑制肿瘤细胞增殖和迁移的能力。我们前期免疫组化结果显示胃癌组织中p-AMPK的表达低于相应的癌旁组织,而TGF-β1的表达高于癌旁组织,同时研究发现AMPK激活能抑制TGF-β1信号转导及其功能。因此我们将探究AMPK的激活能否抑制TGF-β1的表达,本研究将为AMPK激活剂在抑制肿瘤转移的临床应用开辟新的视野。研究方法:1.观察胃癌组织中AMPK活性与TGF-β1指标的关系:通过在南昌大学第一附属医院病理科收集不同临床分期的胃癌标本59例,采用免疫组化技术,对胃癌组织中的AMPK活性与TGF-β1指标进行相关性分析。2.为探讨二甲双胍对TGF-β1的抑制作用,本课题观察二型糖尿病人血清中TGF-β1的表达与二型糖尿病人仅服用二甲双胍后血清中TGF-β1的表达情况:用Milliplex MAP多因子检测技术检测正常人血清和二型糖尿病人血清以及二型糖尿病人服用二甲双胍后血清中TGF-β1的表达,并进行相关性分析,分别选取正常人血清44例,二型糖尿病人血清48例,二型糖尿病人服用二甲双胍后的血清40例进行检测。3.观察AMPK激活剂对胃癌细胞株中TGF-β1的mRNA水平的影响:用荧光定量PCR方法检测胃癌细胞株中TGF-β1的mRNA表达水平。4.观察AMPK激活剂二甲双胍对胃癌细胞株中TGF-β1启动子活性的影响:用双荧光素酶报告基因检测系统检测胃癌细胞株中TGF-β1启动子活性受二甲双胍的影响。5.观察AMPK激活剂二甲双胍对胃癌细胞株中TGF-β1蛋白水平的影响:用免疫印迹技术检测AMPK激活对胃癌细胞株中TGF-β1蛋白表达的影响。结果:1.胃癌组织中AMPK的活性与TGF-β1指标的关系:在不同临床分期的胃癌标本中,p-AMPK和TGF-β1的表达呈负相关,在胃癌癌旁组织中p-AMPK的表达高,TGF-β1的表达低;在胃癌癌组织中p-AMPK的表达低,TGF-β1的表达高。2.二型糖尿病人血清中TGF-β1的表达与二型糖尿病人仅服用二甲双胍后血清中TGF-β1的表达情况的关系:二型糖尿病人血清中TGF-β1的表达明显高于正常人血清中的,同时二型糖尿病人服用二甲双胍后,血清中的TGF-β1的表达显著下降。3.AMPK激活剂对胃癌细胞株中TGF-β1 mRNA水平的影响:在不同的AMPK激活剂处理下,胃癌细胞株中TGF-β1 mRNA水平受到抑制。4.AMPK激活剂二甲双胍对胃癌细胞株中TGF-β1启动子活性的影响:胃癌细胞株中TGF-β1的启动子的活性在用二甲双胍处理后明显降低,在TGF-β1诱导下启动子活性增强。5.AMPK激活剂二甲双胍对胃癌细胞株中TGF-β1蛋白水平的影响:在二甲双胍和TGF-β1药物的处理下,随着TGF-β1作用时间延长,胃癌细胞株中TGF-β1的表达逐渐增强,随着二甲双胍作用时间延长,胃癌细胞株中TGF-β1的表达逐渐减弱。结论:1.胃癌临床标本中AMPK活性下降伴有TGF-β1表达的上升;同时服用二甲双胍的二型糖尿病人血清标本中TGF-β1的表达明显下降。2.AMPK被活化后,胃癌细胞株中TGF-β1的启动子活性,mRNA水平,蛋白水平均受到抑制。3.在胃癌的发生发展中,二甲双胍可能是一个有前途的治疗药物。