红毛丹果皮多酚的分离纯化及其生物活性研究

来源 :昆明理工大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:jj2653026
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本论文以红毛丹果皮作为原料,采用大孔树脂法对提取的红毛丹果皮多酚(NP)进行纯化,分析纯化前后酚酸组成及含量,以三种抗氧化体系(DPPH·、 ABTS·和FRAP)评价了红毛丹果皮多酚纯化前后的抗氧化活性,以及纯化后果皮多酚对AAPH诱导损伤pET23b质粒DNA的保护;同时研究了纯化后果皮多酚对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤的保护;最后研究了纯化前后红毛丹果皮多酚体外抑制蛋白质非酶糖基化的作用,以期为合理利用红毛丹果皮资源提供理论依据。主要研究结果如下:1.比较5种大孔树脂对红毛丹果皮多酚(NP)的静态吸附和解吸效果,筛选出NKA-9树脂为纯化红毛丹果皮多酚的理想吸附剂:吸附等温线研究表明,NKA-9树脂对红毛丹果皮多酚(NP)的吸附不是理想的单分子层吸附,可能具有部分多分子层吸附;静态吸附、解吸试验和动态吸附、洗脱试验表明,当上样浓度为4.37 mg/mL,上样液pH为3.48,上样体积为350 mL,上样流速为1.0 mL/min,其吸附率为93.92%;吸附平衡后,采用120 mL 60%的乙醇溶液,以1.0 mL/min的流速进行动态洗脱,解吸率为90.45%,洗脱峰相对集中、对称,无拖尾现象。2.纯化前后酚酸组成研究表明:纯化前检出14种酚酸,纯化后所检出的5种酚酸中,除咖啡酸外,其余4种酚酸(5-磺基水杨酸、丁香酸、鞣花酸、3,4-二甲氧基苯甲酸)的含量较纯化前都有不同程度的提高,其中纯化后鞣花酸的含量是纯化前的4倍。3.红毛丹果皮多酚(NP)在还原能力、DPPH·清除活性、ABTS·++清除能力三种体外抗氧化能力评价模型中表现出了很好的抗氧化活性,其纯化前EC50及IC50分别为2.67、1.72和1.56 μg/mL,纯化后分别为1.67、1.14和0.87 μg/mL;与纯化前相比,纯化后的抗氧化活性显著提高。凝胶电泳实验表明,AAPH诱导损伤pET23b质粒DNA的最佳浓度为100 mmol/L,且随着纯化后红毛丹果皮多酚(NP)浓度的增大,DNA损伤越来越小,环状DNA保留增多。4.MTT法检测了纯化后红毛丹果皮多酚(NP)对HepG2细胞的毒理性,浓度在5~80 μg/mL,与空白对照组相比,细胞存活率无显著差异(p>0.05),MTT法筛选出最佳H2O2损伤浓度为0.9 mmol/L;纯化后的红毛丹果皮多酚(NP)能有效抑制H2O2对HepG2细胞的诱导损伤,当浓度达到20 μg/mL时,细胞内SOD活力相对水平上升到113.39%,ROS相对水平下降到88.44%,细胞凋亡比例降低到19.56%。5.通过体外蛋白质-葡萄糖非酶糖基化实验可知:第7天时,10 μg/mL纯化前后红毛丹果皮多酚(NP)对Amadori产物、二羰基化合物以及糖基化终产物(AGEs)生成具有一定的抑制作用,且其效果强于阳性对照氨基胍,纯化前抑制率分别为30.8%、32.79%和32.52%,纯化后抑制率分别为37.87%、43.26%和44.07%。
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