云贵川和甘肃地区小麦条锈菌群体的MFLP分析

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小麦条锈病是由小麦条锈菌Puccinia striiformis f. sp. tritici引起的真菌性病害,是严重危害世界许多国家小麦生产的主要流行病害。目前我国是世界上最大的小麦条锈病流行区。种植抗病品种是防治小麦条锈病最经济有效的措施,但是由于条锈菌新毒性小种的不断产生和发展,抗病品种的抗性丧失现象十分严重。小麦条锈菌属专性寄生菌,无法人工培养,基于鉴别寄主来进行的常规小种鉴定及监测方法繁杂、费工费时,严重制约了小麦条锈菌群体遗传与生物学研究。微卫星锚锭片段长度多态性(MFLP)是建立在PCR技术基础上、结合了扩增片段长度多态性(AFLP)和微卫星锚锭引物技术(SSR-anchor primer)双重原理的新一代分子标记技术。本研究建立了适用于专性寄生锈菌的MFLP技术,并首次利用该技术对来自云南、贵州、四川和甘肃地区的73个菌系进行了分子多态性分析,初步揭示了以上地区小麦条锈菌群体的MFLP聚类结构及区间关系。主要研究结果如下:1.通过对DNA提取、限制性内切酶二次酶切、PCR双重扩增等实验因素的选择优化,建立了适用于小麦条锈菌研究的MFLP分子标记分析体系。2.从456对MFLP引物组合中,筛选出13对带型质量好、分辨率高并具有一定多态性的引物组合,在供试73个小麦条锈菌菌系的基因组中,13对引物共扩增出42条多态性条带。3.对云南、贵州、四川以及甘肃四个省份的73个小麦条锈菌标样或菌系进行了MFLP聚类分析,结果表明被测菌系的相似系数的基值为0.47,在相似系数0.60处,被测菌系可划分为A,B两组,没发现优势组群。MFLP聚类结果不能明确区分甘肃和云贵川条锈菌群体,可能与区间存在广泛的菌源交流有关。4.从来自云贵川的27个小麦条锈菌菌系的MFLP聚类分析结果可以看出,其相似系数基值为0.43,在相关系数0.61以上,可划分为2组。在第一组中,除2个四川菌系外,其余均为云贵菌系,第二组中,除3个云贵菌系外,多数为四川菌系,说明云贵川地区的小麦条锈菌群体存在一定的多态性,同时,也可初步推测四川与云南、贵州存在一定程度的菌源交流。5.甘肃菌系也可划分为两组,分别归属于A、B两大组,每组均包括23个菌系,不同流行区域的亚组群体构成存在差异,可能与近年来水源11类群特别是CYR33在甘肃群体的增长有关。MFLP聚类分析结果不能区分天水甘谷县与武山县的条锈菌系,也不能明确区分洮、岷及陇中流行区与渭河上游自生麦苗越夏区的菌系,说明区间存在较频繁的菌源交流。
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