维生素D在溃疡性结肠炎细胞模型中羟化及对紧密连接的影响

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目的:1.探讨维生素D水平不同的的溃疡性结肠炎患者(Ulcerative colitis,UC)疾病活动度、炎症因子及氧化应激指标的差异。2.探究炎性肠癌细胞中维生素D羟化酶的表达、维生素D在炎性结肠癌细胞中的羟化及维生素D对造成紧密连接破坏有关因素的影响。方法:第一部分:根据研究目的所采用的纳入排除标准,收集2016年12月至2019年1月在山西医科大学第一附属医院及同煤集团总医院就诊的UC患者,共50例。采集患者空腹静脉血,部分送往社区医院检查血常规,白蛋白、总蛋白和血沉,用于计算UCAI评分;部分离心,分离血清,置于-80℃冰箱保存,用于血清学指标(炎症因子、氧化应激指标)检测。ELISA检测患者25(OH)D3、炎症因子;生化试剂盒检测患者氧化应激指标。根据血清25(OH)D3水平将其分为非VD缺乏组(≥20ng/ml)和VD缺乏组(<20ng/ml),比较两组间疾病活动度、炎症因子以及氧化应激指标的差异。第二部分:将人结肠癌细胞(SW480、Caco2)分为:正常组(Control)、模型组(LPS)、25(OH)D3组、25(OH)D3+LPS组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+LPS组。相应干预物对其干预培养24小时,Western blot检测维生素D羟化酶CYP27B1、CYP24A1,炎症因子TNF-α、IL-6及紧密连接蛋白Occludin、ZO-1;免疫荧光检测维生素D羟化酶CYP27B1、CYP24A1;ELISA检测1,25(OH)2D3;流式检测细胞凋亡。结果:第一部分:非VD缺乏组与VD缺乏组间UC患者基本情况均衡可比,ELISA结果显示,50名UC患者中25(OH)D3充足(30~100ng/ml)者仅22.0%。VD缺乏组的疾病活动指数稍高于非VD缺乏组(P>0.05);非VD缺乏组中促炎因子TNF-α和IL-1β水平低于VD缺乏组(P<0.05),其他炎症指标CRP、IL-6、IL-17和IL-23无明显差异(P>0.05);非VD缺乏组中氧化应激指标MPO、SOD高于VD缺乏组(P<0.05),其他指标MDA、GSH-Px无明显差异(P>0.05)。第二部分:采用SW480、Caco2细胞为研究对象,LPS干预建立体外炎症性肠病模型。本次研究结果显示,两种结肠癌细胞存在维生素D羟化酶CYP27B1、CYP24A1表达;LPS组羟化酶CYP27B1、CYP24A1与正常对照组相比无明显差异;与LPS组相比,25(OH)D3、25(OH)D3+LPS组羟化酶CYP27B1表达下调;1,25(OH)2D3在25(OH)D3与25(OH)D3+LPS组间无明显差异。与其他组相比,LPS组炎症因子TNF-α和IL-1β表达上调,细胞凋亡增加,封闭性紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达下调;与LPS组相比,1,25(OH)2D3+LPS组炎症因子TNF-α和IL-1β表达下调,细胞凋亡减轻,封闭性紧密连接蛋白Occludin、ZO-1表达上调。结论:结肠部存在维生素D羟化酶CYP27B1、CYP24A1,炎症因子可能不会影响25(OH)D羟化酶的表达,但是充足的VD会下调羟化酶CYP27B1的表达;活性VD可能会降低UC疾病活动度,促进紧密连接相关蛋白表达,抑制可破坏紧密连接的促炎因子和细胞凋亡。
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