【摘 要】
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目的:本课题旨在探讨吴茱萸碱（EVO）对人肺癌NCI H-1299细胞的增殖抑制并诱导细胞死亡的作用及其可能的作用分子机制。方法:体外培养人肺癌细胞株NCI H-1299,应用细胞计数试剂（CCK-8）法检测EVO（1、2.5、5、7.5、10、12.5、15μmol/L）对NCI H-1299处理24h、48h、72h后细胞活力的影响;分析不同浓度的药物及时间因素对NCI H-1299细胞存活率
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目的:本课题旨在探讨吴茱萸碱（EVO）对人肺癌NCI H-1299细胞的增殖抑制并诱导细胞死亡的作用及其可能的作用分子机制。方法:体外培养人肺癌细胞株NCI H-1299,应用细胞计数试剂（CCK-8）法检测EVO（1、2.5、5、7.5、10、12.5、15μmol/L）对NCI H-1299处理24h、48h、72h后细胞活力的影响;分析不同浓度的药物及时间因素对NCI H-1299细胞存活率的影响。Annexin V-FITC+PI双染流式细胞术检测EVO对NCI H-1299细胞凋亡的影响;PI单染流式细胞术检测EVO对NCI H-1299细胞周期的影响;Western blot检测细胞周期相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达变化。结果:体外EVO处理24h、48h、72h后,与对照组相比,CCK-8细胞计数结果显示,EVO能显著抑制NCI H-1299细胞的增殖活性,细胞增殖活力随着EVO浓度增加呈显著下降趋势,不同给药剂量组之间比较存在显著性差异（F=5091.83,P<0.01）,且与时间点存在交互作用（F=1241.80,P<0.01）,呈时间和剂量依赖性。PI单染流式细胞术结果表明12.5μmol/L EVO处理细胞24h后,NCI H-1299被阻滞于G2/M期（P<0.05）;Annexin V-FITC+PI双染流式细胞术结果表明12.5μmol/L EVO处理细胞24h后,NCI H-1299细胞凋亡率显著上升（P<0.05）。Western Blot结果显示,12.5μmol/L EVO处理细胞后,能下调细胞周期促进蛋白Cdc25C的表达,促进细胞周期抑制蛋白p53的表达、Cdc2磷酸化水平、Cyclin B1蛋白水平和Cdc25C（间期）水平明显上升,表明NCI H-1299细胞被阻滞于G2/M期;细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和PARP1被活化,Bax/Bcl-2比值明显降低,表明EVO可在NCI H-1299细胞中诱导内源性细胞凋亡;另外RIP1、RIP3、和MLKL蛋白磷酸化水平明显上升,表明EVO可诱导NCI H-1299细胞程序性坏死。结论:EVO可在NCI H-1299细胞中抑制细胞增殖、呈时间-浓度依赖性,显著诱导NCI H-1299的G2/M细胞周期阻滞、内源性凋亡和程序性坏死,从而发挥抗肿瘤作用。
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