NeuroD2属于bHLH分化因子家族中的一员,是神经源性分化蛋白Neuro D蛋白亚家族中的一种,是一种不可或缺的转录因子,它可以通过与E-BOX的结合启动下游基因的转录。目前Neuro D其他家族中的成员有较多研究。NeuroD2虽然其具体调控机理仍不清楚,但Neuro D家族在成体动物的神经细胞的生存发育及胚胎期脑组织发育过程中都起着重要的调控作用。本课题首先运用生物信息学方法,结合DNAMAN等相关生物软件经比较分析得出小鼠Neuro D家族成员和人的Neuro D家族成员中NeuroD2基因序列和蛋白序列的同源性相对较高。所以我们认为NeuroD2有着较为重要的研究价值和较为重要的作用。其次,我们通过实验,确定了小鼠的内源性蛋白NeuroD2的亚细胞定位。然后通过Pull-down分析实验,确定了NeuroD2蛋白与14-3-3epsilonepsilon蛋白有相互作用。之后我们构建了14-3-3epsilonepsilon-RNAi的载体和NeuroD2的真核表达载体来研究14-3-3epsilonepsilon蛋白会不会对NeuroD2的亚细胞定位产生影响。为了检测NeuroD2蛋白的分布,我们将载体转染Hela细胞,同时分别提取胞核蛋白和胞质蛋白做Western blot。通过RNAi抑制技术我们可以得知14-3-3epsilonepsilon被抑制后,NeuroD2的入核效率明显的降低,但仍有一部分入核。我们分析,一方面有可能是有一些与14-3-3epsilonepsilon可以起到相同作用的蛋白参与NeuroD2进入细胞核的过程;另一方面,由于细胞中可能还残存着一些14-3-3epsilonepsilon蛋白,这些蛋白参与了NeuroD2进入细胞核的过程。