重组禽β-防御素2和6协同抗禽肿瘤病毒感染研究

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leoni002
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
近年来,随着我国养禽业的迅速发展,规模扩大化,集约化、高密度的饲养方式成为普遍的饲养模式,这也造成了肿瘤性免疫抑制疫病的大规模爆发,比如REV、MDV、ALV-J等。禽肿瘤病病毒(ALV-J、REV、MDV)会引起种鸡、肉鸡、蛋鸡等各个品系鸡群肿瘤相关性疾病,长期给我国养禽业带来巨大的危害和经济损失。禽肿瘤病的流行严重影响到我国养禽业的发展。而针对该类型的流行病目前尚无非常有效的治疗和免疫的方法,因此,开发抗禽肿瘤病毒的无毒、无副作用的新型生物药物非常必要。禽β-防御素是一类内源性阳离子抗菌肽,富含半胱氨酸,分子内由保守的6个半胱氨酸残基组成3对稳定的二硫键。禽β-防御素在禽类免疫系统中起着十分重要的作用,是抵抗外界病原微生物入侵机体的重要保护膜,具有广谱抗真菌、抗菌、抗病毒的生物学作用。为研究鸡AvBD抗禽肿瘤病病毒的作用,根据鸡AvBD的同源性、体内组织分布情况等特点,从14种鸡AvBD中选择了鸡AvBD2和鸡AvBD6进行抗禽肿瘤病病毒的研究。使用PCR的方法,从SPF鸡的睾丸和肝脏组织中分别扩增到鸡AvBD2和AvBD6基因。将两种AvBD克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-AvBD,把重组质粒转化到表达菌DH5α中,通过IPTG诱导表达AvBD2和AvBD6的融合蛋白,表达产物以包涵体的形式存在。将表达的重组蛋白纯化复性后成功得到了具有天然生物活性的鸡AvBD2和AvBD6。对接种病毒(ALV-J、MDV、REV)的CEF细胞再分别加入不同浓度的AvBD2和AvBD6以及两种蛋白的混合。通过实时荧光定量PCR、Western blot分别检测各试验组中病毒转录水平和蛋白水平,发现AvBD2和AvBD6均对ALVJ、MDV、REV病毒有抑制作用,随着加入蛋白浓度的增加抑制效果加强,并且两种禽β-防御素协同性抑制了ALV-J、MDV、REV病毒的复制。选择AvBD抑制效果最明显的ALV-J病毒,进行动物体内的抗病毒感染试验,试验组共分为7组:ALV-J、AvBD2+ALV-J、AvBD6+ALV-J、AvBD2+AvBD6+ALV-J、AvBD2、AvBD6、AvBD2+AvBD6。即前4组都为接ALV-J组,其中3组再分别接入相应的蛋白,后3组为接蛋白组,只接入蛋白。对已攻毒成功的SPF雏鸡接种AvBD2和AvBD6以及混合的两种AvBD蛋白,未攻毒的SPF雏鸡也接种相应组别的AvBD蛋白进行对照,连续接种两次后剖杀,从大体器官、组织病理学、血液学来进行试验分析。剖检后观察到4个攻毒组的肝脏、心脏、脾脏和肺脏发育大小均不如非攻毒组,而且4个攻毒中,ALV-J组与其他ALV-J+AvBD组相比,肝脏、心脏、肺脏、脾脏等主要器官发育较小。通过组织病理学观察发现,在4组接ALV-J组中,肝脏出现淋巴细胞炎性灶;肺脏出现淋巴细胞炎性灶,弥漫性充血;肾脏肾小管上皮细胞空泡变性,弥漫性充血,淋巴细胞浸润;胸腺弥漫性充血,淋巴细胞大量流失;脾脏弥漫性充血。其中ALV-J组病变情况最为严重,而3组AvBD+ALV-J组中各器官的病变情况次之,ALV-J+AvBD2+AvBD6组器官病变情况最轻微。从血涂片观察到4个攻毒组血液中异嗜性粒细胞数量增多,淋巴细胞增多,4个攻毒中,3个ALV-J+AvBD组血液中异嗜性粒细胞和淋巴细胞数量比ALV-J组要少。从上述的体内试验可得出,AvBD2和AvBD6在鸡体内可以抑制ALV-J病毒,具有抵抗感染效果,并且具有协同抗感染作用。本研究运用pGEX-6P-1载体,DH5α表达菌成功建立鸡AvBD2和AvBD6的体外原核表达方法。并通过实时荧光定量PCR,Western blot等方法对鸡AvBD2和AvBD6体外协同抗禽肿瘤病病毒(ALV-J、REV、MDV)进行研究。通过大体剖检器官观察,病理组织学,血液学等方法对鸡AvBD2和AvBD6体内协同抗ALV-J进行研究。以上研究对禽β-防御素在体外表达、研发抗禽肿瘤病病毒生物药物以及抗囊膜病毒机制等研究上奠定一定的基础。
其他文献
利用1996年至2004年上证综合指数和深证综合指数数据,对股指收益的分布特性进行了多角度的实证考察.在正态性假设被拒绝以后,利用国际上考察股票收益分布所使用的几个分布函数—
科学技术是一把双刃剑。我们应当也必须在科技进步的双重效应面前充分发挥主观能动性。使科技技术扬长避短,为我所用,依靠科技进步,推动经济社会可持续发展。
经过十几年的探索与实践,我国已初步形成了干部教育培训体系,在培训基地的建设、师资队伍的培养、培训意识的树立、培训管理制度的健全以及培训方法的创新上均取得了一定的进
当你决定拥有一头罗威纳幼犬时就意味着你的新生活开始了。你第一件要做的事情是你得决定未来要得到什么样的罗威纳犬?家庭犬、工作犬、展示犬还是展示+繁殖犬等等。
运用问卷调查和文献资料等方法.对苏州市域镇居民体育消费观念、体育消费动机、体育消费水平、体育消费结构、体育消费影响因素进行了分析研究.结果表明:居民对体育的功能和作
本文运用问卷调查法、数理统计法、文献资料法等研究方法,对高职院校学生的体育参与情况进行调查分析。结果表明,大多数学生对于体育的认识比较粗浅不够科学,存在较多盲区;在体育
牛场肉牛繁殖率的高低直接影响牛场的生产效率和经济效益。肉牛情期受胎率的高低受诸多因素的影响,提高肉牛的情期受胎率是母牛场繁育工作的重中之重。本文从影响母牛受胎率的
通过探讨分析轮岗制在高校图书馆中应用的必要性,提出了高校图书馆在实施轮岗制过程中应采取的措施,以期趋利除弊,发挥轮岗制的优势,找到适合高校图书馆工作实际的轮岗模式,推动高